| 摘要 | 第2-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-28页 |
| 1.1 猪瘟病毒在宿主细胞中复制机制的研究进展 | 第13-17页 |
| 1.1.1 CSFV基因组结构 | 第13-15页 |
| 1.1.2 CSFV在宿主细胞中的增殖过程 | 第15-16页 |
| 1.1.3 宿主细胞多条信号通路与生物合成系统参与调控CSFV复制 | 第16-17页 |
| 1.2 mTOR信号通路的研究 | 第17-22页 |
| 1.2.1 mTOR信号通路上游信号调控 | 第18-19页 |
| 1.2.2 mTOR信号通路下游效应分子与生物学功能 | 第19-21页 |
| 1.2.3 mTOR信号通路的负反馈循环 | 第21-22页 |
| 1.3 mTOR信号通路与病毒感染研究进展 | 第22-27页 |
| 1.3.1 mTOR上游分子PI3K/Akt与病毒感染 | 第23-25页 |
| 1.3.2 mTOR上游分子TSC2与病毒感染 | 第25-26页 |
| 1.3.3 mTOR下游效应分子与病毒感染 | 第26-27页 |
| 1.4 小结 | 第27-28页 |
| 第二章 CSFV劫持宿主细胞mTOR信号通路参与病毒复制的研究 | 第28-51页 |
| 2.1 材料 | 第28-31页 |
| 2.1.1 毒株、细胞、质粒和药物 | 第28-29页 |
| 2.1.2 细胞培养相关试剂 | 第29页 |
| 2.1.3 细胞信号通路芯片检测试剂盒 | 第29页 |
| 2.1.4 蛋白印迹相关试剂和耗材 | 第29页 |
| 2.1.5 质粒提取与细胞转染相关试剂 | 第29-30页 |
| 2.1.6 细胞增殖检测主要试剂 | 第30页 |
| 2.1.7 荧光定量PCR主要试剂和耗材 | 第30页 |
| 2.1.8 CSFV滴度测定主要试剂和耗材 | 第30-31页 |
| 2.1.9 主要仪器 | 第31页 |
| 2.2 方法 | 第31-38页 |
| 2.2.1 病毒接种与药物处理 | 第31-32页 |
| 2.2.2 细胞信号通路芯片检测 | 第32-33页 |
| 2.2.3 Western-blot分析 | 第33-35页 |
| 2.2.4 真核质粒瞬时转染ST细胞 | 第35页 |
| 2.2.5 SRB检测细胞增殖活性 | 第35-36页 |
| 2.2.6 荧光定量PCR测定CSFV RNA拷贝数 | 第36-37页 |
| 2.2.7 CSFV滴度测定 | 第37-38页 |
| 2.2.8 数据分析 | 第38页 |
| 2.3 结果 | 第38-47页 |
| 2.3.1 CSFV感染抑制mTOR信号通路相关蛋白的磷酸化激活 | 第38-39页 |
| 2.3.2 CSFV感染抑制Akt/mTOR及下游蛋白的磷酸化激活 | 第39-40页 |
| 2.3.3 CSFV结构蛋白E~(rns)、非结构蛋白NS3、NS5A抑制Akt/mTOR通路激活 | 第40-42页 |
| 2.3.4 CSFV感染情况下mTOR激活剂/抑制剂依然能促进或抑制mTOR通路激活 | 第42-43页 |
| 2.3.5 mTOR激活剂/抑制剂能显著促进或抑制ST细胞的增殖 | 第43-44页 |
| 2.3.6 mTOR信号通路负调控CSFV蛋白表达 | 第44-45页 |
| 2.3.7 mTOR信号通路负调控CSFV的基因组拷贝数和病毒滴度 | 第45-46页 |
| 2.3.8 Akt激酶活性负调控CSFV基因组拷贝数 | 第46-47页 |
| 2.4 讨论 | 第47-49页 |
| 2.5 小结 | 第49-51页 |
| 第三章 mTOR信号通路介导CSFV复制的分子机制研究 | 第51-82页 |
| 3.1 材料 | 第52-55页 |
| 3.1.1 毒株、细胞和质粒 | 第52页 |
| 3.1.2 细胞培养及药物 | 第52页 |
| 3.1.3 透射电镜和蛋白印迹相关试剂和耗材 | 第52页 |
| 3.1.4 LC3双荧光慢病毒检测自噬流 | 第52-53页 |
| 3.1.5 细胞增殖检测 | 第53页 |
| 3.1.6 CSFV基因组拷贝数测定主要试剂和耗材 | 第53页 |
| 3.1.7 CSFV滴度测定主要试剂 | 第53页 |
| 3.1.8 重组质粒构建相关试剂 | 第53页 |
| 3.1.9 S6K1的shRNAs干扰质粒构建 | 第53-54页 |
| 3.1.10 S6K1过表达质粒构建 | 第54页 |
| 3.1.11 免疫共沉淀相关试剂和耗材 | 第54页 |
| 3.1.12 动物细胞胞质核糖体分离 | 第54页 |
| 3.1.13 细胞周期检测试剂和耗材 | 第54-55页 |
| 3.1.14 主要仪器 | 第55页 |
| 3.2 方法 | 第55-61页 |
| 3.2.1 透射电镜检测CSFV诱导的自噬小体 | 第55-56页 |
| 3.2.2 Western-blot分析 | 第56页 |
| 3.2.3 LC3双荧光慢病毒检测CSFV诱导ST细胞自噬流变化 | 第56页 |
| 3.2.4 LC3双荧光慢病毒检测改变mTOR/ULK1通路活性自噬水平的变化 | 第56-57页 |
| 3.2.5 荧光定量PCR检测CSFV基因组拷贝数 | 第57页 |
| 3.2.6 CSFV滴度检测 | 第57页 |
| 3.2.7 SRB检测细胞增殖 | 第57页 |
| 3.2.8 含CSFV-IRES的萤火虫荧光素酶重组质粒构建 | 第57-58页 |
| 3.2.9 含CSFV-IRES的萤火虫荧光素酶重组质粒活性鉴定 | 第58页 |
| 3.2.10 双荧光素酶报告基因检测系统 | 第58-59页 |
| 3.2.11 免疫共沉淀分析 | 第59-60页 |
| 3.2.12 动物细胞胞质核糖体分离 | 第60页 |
| 3.2.13 IFA检测CSFV在核糖体样品中存在情况 | 第60-61页 |
| 3.2.14 荧光定量PCR检测核糖体40S亚基结合CSFV-IRES情况 | 第61页 |
| 3.2.15 PI细胞周期检测 | 第61页 |
| 3.2.16 数据分析 | 第61页 |
| 3.3 结果 | 第61-79页 |
| 3.3.1 透射电镜检测CSFV诱导的自噬小体 | 第61-62页 |
| 3.3.2 CSFV感染诱导ST细胞的自噬 | 第62-63页 |
| 3.3.3 CSFV感染诱导ST细胞发生完整的自噬流 | 第63-64页 |
| 3.3.4 CSFV通过mTOR/ULK1依赖的途径诱导自噬 | 第64-67页 |
| 3.3.5 抑制ULK1活性抑制CSFV复制 | 第67-68页 |
| 3.3.6 含CSFV-IRES萤火虫荧光素酶重组质粒构建及活性鉴定结果 | 第68-70页 |
| 3.3.7 S6K1负调控CSFV-IRES的蛋白翻译驱动活性 | 第70-72页 |
| 3.3.8 S6K1负调控CSFV的复制 | 第72-73页 |
| 3.3.9 CSFV感染促进S6K1与eIF3复合物的形成,释放40S核糖体与IRES的结合位点,促进病毒mRNA翻译 | 第73-76页 |
| 3.3.10 CSFV抑制mTOR诱导Akt负反馈激活维持细胞稳态和自身复制 | 第76-79页 |
| 3.4 讨论 | 第79-81页 |
| 3.5 小结 | 第81-82页 |
| 全文结论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-95页 |
| 致谢 | 第95-97页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第97-98页 |
