| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-22页 |
| 1 研究问题的由来 | 第13-14页 |
| 2 国内外研究综述 | 第14-20页 |
| 2.1 鱼类抗菌肽简介 | 第14-17页 |
| 2.1.1 鱼类抗菌肽分类 | 第14-16页 |
| 2.1.2 鱼类抗菌肽的应用展望 | 第16-17页 |
| 2.2 NK-lysin的研究进展 | 第17-19页 |
| 2.2.1 NK-lysin基因分布及结构分析 | 第17-18页 |
| 2.2.2 NK-lysin基因的表达分析 | 第18页 |
| 2.2.3 NK-lysin基因的生物学功能 | 第18-19页 |
| 2.3 抗菌肽H2A衍生肽研究进展 | 第19-20页 |
| 3 研究目的与意义 | 第20-22页 |
| 第二章 团头鲂三个抗菌肽基因序列和表达分析 | 第22-41页 |
| 第一节 团头鲂nkla和nklb基因鉴定及表达分析 | 第22-36页 |
| 1 实验材料与方法 | 第22-28页 |
| 1.1 样品的采集 | 第22-23页 |
| 1.1.1 胚胎及胚后发育期样品的采集 | 第22页 |
| 1.1.2 组织样品的采集 | 第22页 |
| 1.1.3 细菌感染样品的采集 | 第22-23页 |
| 1.2 主要仪器设备及试剂 | 第23-24页 |
| 1.2.1 主要的仪器设备 | 第23页 |
| 1.2.2 主要的试剂药品 | 第23页 |
| 1.2.3 主要试剂配制 | 第23-24页 |
| 1.3 引物设计与合成 | 第24页 |
| 1.4 实验方法 | 第24-28页 |
| 1.4.1 Trizol法提取总RNA | 第24-25页 |
| 1.4.2 cDNA第一条链的合成及PCR扩増 | 第25-26页 |
| 1.4.3 PCR产物分离、回收与纯化 | 第26页 |
| 1.4.4 目的基因克隆与筛选 | 第26-27页 |
| 1.4.5 qRT-PCR标准曲线的建立及qRT-PCR | 第27-28页 |
| 1.5 序列分析 | 第28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-34页 |
| 2.1 总RNA提取结果 | 第28页 |
| 2.2 团头鲂nkla和nklb基因序列分析 | 第28-31页 |
| 2.3 团头鲂nkla和nklb不同发育时期表达和组织分布 | 第31-32页 |
| 2.4 团头鲂nkla和nklb在嗜水气单胞菌感染后的表达 | 第32-34页 |
| 3.讨论 | 第34-36页 |
| 第二节 团头鲂H2A基因鉴定及序列分析 | 第36-41页 |
| 1 实验材料与方法 | 第36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-40页 |
| 2.1 团头鲂H2A基因序列分析 | 第36页 |
| 2.2 团头鲂H2A基因在不同发育时期表达和组织分布 | 第36-39页 |
| 2.3 团头鲂H2A基因在嗜水气单胞菌感染后的表达 | 第39-40页 |
| 3 讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 团头鲂NK-lysin基因的原核表达 | 第41-53页 |
| 1 实验材料 | 第41-42页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第41页 |
| 1.2 主要仪器设备及试剂 | 第41页 |
| 1.2.1 主要仪器 | 第41页 |
| 1.2.2 主要药品 | 第41页 |
| 1.2.3 主要试剂配制 | 第41页 |
| 1.3 引物设计与合成 | 第41-42页 |
| 2 实验方法 | 第42-45页 |
| 2.1 NK-LYSIN成熟肽序列生物信息学分析 | 第42页 |
| 2.2 原核重组质粒的构建 | 第42-45页 |
| 2.2.1 目的基因的扩增及纯化 | 第42页 |
| 2.2.2 表达载体质粒的提取 | 第42-43页 |
| 2.2.3 目的基因与表达载体的双酶切 | 第43页 |
| 2.2.4 目的基因与原核表达载体的连接与转化 | 第43-44页 |
| 2.2.5 重组蛋白的诱导表达 | 第44页 |
| 2.2.6 原核表达条件的优化 | 第44页 |
| 2.2.7 SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳检测 | 第44-45页 |
| 2.2.8 重组蛋白的纯化 | 第45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-51页 |
| 3.1 NK-LYSIN成熟肽序列生物信息学分析 | 第45页 |
| 3.2 重组表达载体的构建 | 第45-48页 |
| 3.3 pET28a-NKLA和p ET28a-NKLB重组质粒原核表达结果 | 第48-49页 |
| 3.4 pET32a-NKLA和p ET32a-NKLB重组质粒原核表达结果 | 第49-50页 |
| 3.5 pGEX-NKLA和pGEX-NKLB重组质粒原核表达结果 | 第50-51页 |
| 3.6 pET32a-NKLB融合蛋白的纯化 | 第51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 小结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
