| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-26页 |
| 1.1 萜类化合物及其生物合成途径 | 第12-20页 |
| 1.1.1 萜类化合物概述 | 第12-14页 |
| 1.1.2 萜类化合物前体合成的甲羟戊酸途径与2-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸途径 | 第14-18页 |
| 1.1.3 代谢工程合成萜类化合物的主要策略 | 第18-20页 |
| 1.2 巴伦西亚橘烯 | 第20-21页 |
| 1.2.1 巴伦西亚橘烯的基本性质 | 第20页 |
| 1.2.2 生物合成巴伦西亚橘烯的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.3 圆柚酮 | 第21-25页 |
| 1.3.1 圆柚酮的基本性质 | 第21页 |
| 1.3.2 圆柚酮的用途 | 第21-22页 |
| 1.3.3 圆柚酮的提取与化学合成 | 第22页 |
| 1.3.4 生物合成圆柚酮的研究进展 | 第22-25页 |
| 1.4 论文立题依据及主要内容 | 第25-26页 |
| 第二章 高产巴伦西亚橘烯菌株构建及产量分析 | 第26-48页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第26-34页 |
| 2.1.1 培养基 | 第26-27页 |
| 2.1.2 主要的酶与试剂 | 第27页 |
| 2.1.3 引物与基因的体外合成 | 第27-29页 |
| 2.1.4 载体构建实验操作 | 第29-31页 |
| 2.1.5 酵母菌株构建 | 第31-33页 |
| 2.1.6 细胞生长曲线的测定 | 第33页 |
| 2.1.7 摇瓶培养流程 | 第33页 |
| 2.1.8 气相色谱以及气相色谱-质谱联用检测巴伦西亚橘烯 | 第33页 |
| 2.1.9 气相色谱以及气相色谱-质谱联用检测法尼醇 | 第33页 |
| 2.1.10 细胞干重的测定 | 第33-34页 |
| 2.1.11 遗传霉素抗性基因(KanMX)消除 | 第34页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第34-47页 |
| 2.2.1 合成巴伦西亚橘烯酿酒酵母菌株的构建 | 第34-39页 |
| 2.2.2 法尼基焦磷酸合酶与巴伦西亚橘烯合酶的融合表达 | 第39-42页 |
| 2.2.3 过表达羟甲基戊二酰辅酶A还原酶tHMG1提高前体分子供应 | 第42-44页 |
| 2.2.4 下调角鲨烯合酶表达水平以提高巴伦西亚橘烯产量 | 第44-46页 |
| 2.2.5 竞争途径法尼醇产量的测定 | 第46-47页 |
| 2.3 本章小结 | 第47-48页 |
| 第三章 巴伦西亚橘烯氧化酶的筛选与改造 | 第48-64页 |
| 3.1 实验方法与材料 | 第48-51页 |
| 3.1.1 引物与基因的体外合成 | 第48-49页 |
| 3.1.2 载体构建与酿酒酵母菌株构建 | 第49-50页 |
| 3.1.3 半理性突变体构建流程 | 第50页 |
| 3.1.4 摇瓶培养条件 | 第50页 |
| 3.1.5 气相色谱以及气相色谱-质谱联用检测圆柚酮 | 第50页 |
| 3.1.6 其他常规分子生物学实验方法及微生物学实验技术 | 第50-51页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第51-62页 |
| 3.2.1 脂肪氧化酶LOX1与细胞色素氧化酶HPO表达菌株构建 | 第51-56页 |
| 3.2.2 优化发酵培养方法以提高圆柚酮产量 | 第56-60页 |
| 3.2.3 HPO半理性突变体库的构建 | 第60-62页 |
| 3.3 本章小结 | 第62-64页 |
| 第四章 催化圆柚醇生成圆柚酮的醇脱氢酶的筛选 | 第64-72页 |
| 4.1 实验方法与材料 | 第64-66页 |
| 4.1.1 引物与基因的体外合成 | 第64-65页 |
| 4.1.2 载体构建与酵母菌株构建实验操作 | 第65-66页 |
| 4.1.3 其他常规分子生物学实验方法及微生物学实验技术 | 第66页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第66-71页 |
| 4.2.1 过表达脱氢酶菌株构建 | 第69页 |
| 4.2.2 不同脱氢酶过表达菌株圆柚酮产量对比 | 第69-71页 |
| 4.3 本章小结 | 第71-72页 |
| 全文工作总结与展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第85页 |
