| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第11-40页 |
| 1 益生菌的研究进展 | 第11-21页 |
| 1.1 概述 | 第11页 |
| 1.2 益生菌的分类 | 第11-13页 |
| 1.3 乳酸菌益生性的研究 | 第13-15页 |
| 1.3.1 概述 | 第13-14页 |
| 1.3.2 乳酸菌的宿主定植特性 | 第14-15页 |
| 1.3.3 乳酸菌相关的免疫活性分子 | 第15页 |
| 1.4 乳酸菌与机体免疫应答的相互关系 | 第15-21页 |
| 1.4.1 肠道免疫应答细胞 | 第15-17页 |
| 1.4.2 MAMPs分子类型 | 第17-18页 |
| 1.4.3 PRRs免疫应答途径 | 第18-21页 |
| 2 肠道炎症与抑炎机理 | 第21-29页 |
| 2.1 肠道炎症反应 | 第21-25页 |
| 2.1.1 炎症性肠疾病(Inflammatory bowel diseases,IBD) | 第21-23页 |
| 2.1.2 IBD的流行病学研究 | 第23页 |
| 2.1.3 IBD与肠道菌群的关系 | 第23-25页 |
| 2.2 肠炎信号传导机制 | 第25-27页 |
| 2.2.1 IBD相关的T细胞激活途径 | 第25-26页 |
| 2.2.2 IBD相关的B细胞激活途径 | 第26页 |
| 2.2.3 IBD相关的NF-κB途径 | 第26-27页 |
| 2.3 抑炎机理 | 第27-29页 |
| 2.3.1 LAB对IBD的预防治疗作用 | 第27页 |
| 2.3.2 巨噬细胞参与的IBD免疫调节 | 第27-28页 |
| 2.3.3 NF-κB信号途径的抑制作用 | 第28-29页 |
| 3 脂多糖及其激活的肠道炎症反应 | 第29-32页 |
| 3.1 概述 | 第29-30页 |
| 3.1.1 LPS的结构及主要功能 | 第29页 |
| 3.1.2 LPS结合蛋白 | 第29-30页 |
| 3.2 LPS-TLR4激活的细胞内信号通路 | 第30-32页 |
| 3.2.1 MAPKs激酶信号途径 | 第31-32页 |
| 3.2.2 NF-κB信号通路 | 第32页 |
| 4 嗜酸乳杆菌细胞壁肽聚糖的研究进展 | 第32-36页 |
| 4.1 肽聚糖的结构 | 第33页 |
| 4.2 肽聚糖的功能性研究 | 第33-35页 |
| 4.2.1 NAG的相关研究 | 第34-35页 |
| 4.2.2 NAM的相关研究 | 第35页 |
| 4.3 肽聚糖与NOD2信号途径 | 第35-36页 |
| 5 研究内容、思路和方法 | 第36-40页 |
| 5.1 研究内容 | 第36-37页 |
| 5.1.1 L.acidophilus细胞壁PGN的提取及鉴定 | 第36-37页 |
| 5.1.2 L.acidophilus细胞壁PGN的功能研究 | 第37页 |
| 5.2 研究思路 | 第37-38页 |
| 5.3 研究方法 | 第38-40页 |
| 5.3.1 海洋源嗜酸乳杆菌的分离鉴定 | 第38页 |
| 5.3.2 嗜酸乳杆菌细胞壁PGN的提取鉴定 | 第38页 |
| 5.3.3 PGN分子量及结构分析 | 第38页 |
| 5.3.4 细胞模型分析PGN对巨噬细胞信号系统的免疫调控效应 | 第38-39页 |
| 5.3.5 小鼠模型分析PGN对小肠肠道粘膜的免疫调控效应 | 第39-40页 |
| 第2章 嗜酸乳杆菌PGN的提取鉴定 | 第40-52页 |
| 第1节 嗜酸乳杆菌PGN的提取 | 第42-46页 |
| 1 材料与方法 | 第42-43页 |
| 1.1 菌种及培养条件 | 第42页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第42页 |
| 1.3 PGN提取 | 第42-43页 |
| 1.4 PGN的荧光显微观察 | 第43页 |
| 1.5 PGN的SEM观察 | 第43页 |
| 2 实验结果 | 第43-44页 |
| 2.1 荧光显微镜下的PGN | 第43-44页 |
| 2.2 SEM观察PGN的形态 | 第44页 |
| 3 讨论 | 第44-46页 |
| 第2节 嗜酸乳杆菌PGN的结构分析 | 第46-52页 |
| 1 材料与方法 | 第46-47页 |
| 1.1 可溶性PGN的制备 | 第46页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第46页 |
| 1.3 可溶性PGN的HPLC分析 | 第46页 |
| 1.4 可溶性PGN的MALDI-TOF/TOF MS分析 | 第46-47页 |
| 1.5 可溶性PGN的傅里叶变换红外光谱技术(FT-IR)和氨基酸成分分析 | 第47页 |
| 2 实验结果 | 第47-50页 |
| 2.1 HPLC Aminex HPX-87H分析PGN特性 | 第47-48页 |
| 2.2 PGN分子片段的MALDI-TOF/TOF MS分析 | 第48-49页 |
| 2.3 PGN分子片段的FT-IR、NMR及氨基酸组成分析 | 第49-50页 |
| 3 讨论 | 第50-52页 |
| 第3章 嗜酸乳杆菌PGN的体外抗炎活性 | 第52-69页 |
| 第1节 巨噬细胞RAW 264.7对PGN的吞噬活性 | 第53-57页 |
| 1 材料与方法 | 第53-54页 |
| 1.1 细胞及培养条件 | 第53页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第53页 |
| 1.3 荧光标记的制作方法 | 第53页 |
| 1.4 RAW264.7细胞及PGN的荧光标记 | 第53-54页 |
| 1.5 酸化溶酶体的荧光标记 | 第54页 |
| 2 实验结果 | 第54-56页 |
| 2.1 LPS诱导巨噬细胞RAW 264.7对PGN吞噬作用 | 第54-55页 |
| 2.2 巨噬细胞RAW 264.7对PGN吞噬在酸化溶酶体中进行 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56-57页 |
| 第2节 PGN对LPS诱导RAW 264.7细胞的抗炎活性 | 第57-61页 |
| 1 材料与方法 | 第57-58页 |
| 1.1 细胞及培养条件 | 第57页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第57页 |
| 1.3 细胞培养及巨噬细胞RAW264.7炎症模型建立 | 第57页 |
| 1.4 PGN对巨噬细胞RAW264.7活力的影响 | 第57-58页 |
| 1.5 炎性相关蛋白检测 | 第58页 |
| 2 实验结果 | 第58-60页 |
| 2.1 PGN对LPS诱导巨噬细胞RAW 264.7的形态影响 | 第58-59页 |
| 2.2 PGN对LPS诱导巨噬细胞RAW264.7中炎症蛋白的影响 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-61页 |
| 第3节 PGN单体结构对LPS诱导RAW264.7细胞的抗炎活性 | 第61-69页 |
| 1 材料与方法 | 第61-64页 |
| 1.1 细胞及培养条件 | 第61页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第61页 |
| 1.3 细胞培养及巨噬细胞RAW264.7炎症模型建立 | 第61-62页 |
| 1.4 PGN单体成分对巨噬细胞RAW264.7活力的影响 | 第62页 |
| 1.5 RNA提取 | 第62页 |
| 1.6 cDNA合成及RT-qPCR | 第62-63页 |
| 1.7 细胞因子测定 | 第63-64页 |
| 2 实验结果 | 第64-67页 |
| 2.1 RNA提取效果验证 | 第64页 |
| 2.2 PGN单体成分对炎症因子的抑制作用 | 第64-66页 |
| 2.3 NAM对NF-κB通路相关蛋白的影响 | 第66-67页 |
| 2.4 NAM对TLR-4受体蛋白的影响 | 第67页 |
| 3 讨论 | 第67-69页 |
| 第4章 NAM抗炎活性的iTRAQ蛋白组学分析 | 第69-83页 |
| 第1节 iTRAQ蛋白定量分析 | 第71-76页 |
| 1 材料与方法 | 第71-74页 |
| 1.1 细胞及培养条件 | 第71页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第71页 |
| 1.3 实验流程 | 第71-74页 |
| 1.3.1 蛋白样本准备 | 第71-72页 |
| 1.3.2 蛋白裂解及iTRAQ放射标记 | 第72-73页 |
| 1.3.3 RP-HPLC分离多肽 | 第73页 |
| 1.3.4 LC-MS/MS分析多肽组成 | 第73-74页 |
| 2 实验结果 | 第74-75页 |
| 2.1 iTRAQ鉴定蛋白统计 | 第74页 |
| 2.2 差异蛋白相关的细胞信号途径 | 第74-75页 |
| 3 讨论 | 第75-76页 |
| 第2节 生物信息学分析炎症相关信号途径 | 第76-79页 |
| 1 分析方法 | 第76-77页 |
| 1.1 在线数据库 | 第76页 |
| 1.2 聚类分析 | 第76-77页 |
| 2 实验结果 | 第77-78页 |
| 2.1 聚类分析鉴定差异蛋白相关的代谢途径 | 第77页 |
| 2.2 NAM处理组中的差异蛋白分析 | 第77-78页 |
| 3 讨论 | 第78-79页 |
| 第3节 炎症相关信号途径验证 | 第79-83页 |
| 1 材料与方法 | 第79-80页 |
| 1.1 试剂与仪器 | 第79页 |
| 1.2 胞内钙离子浓度[Ca~(2+)]_i测定 | 第79页 |
| 1.3 Western Blotting分析 | 第79-80页 |
| 1.4 RT-PCR相关分析 | 第80页 |
| 2 实验结果 | 第80-83页 |
| 2.1 钙信号在抑炎反应中的作用 | 第80-82页 |
| 2.2 TLR4信号途径在抗炎反应中的作用 | 第82-83页 |
| 3 讨论 | 第83页 |
| 第5章 嗜酸乳杆菌PGN在小鼠模型中的抗炎活性初探 | 第83-93页 |
| 第1节 PGN对小鼠肠黏膜保护作用 | 第85-89页 |
| 1 材料与方法 | 第85-87页 |
| 1.1 试验动物 | 第85页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第85页 |
| 1.3 小鼠模型的建立 | 第85-86页 |
| 1.4 小鼠样本采集 | 第86页 |
| 1.5 肠粘膜形态学观察 | 第86页 |
| 1.6 血清生化指标检测 | 第86-87页 |
| 1.7 统计学分析 | 第87页 |
| 2 实验结果 | 第87-88页 |
| 2.1 PGN对肠粘膜形态的影响 | 第87-88页 |
| 2.2 NAM对肠粘膜分泌细胞因子的影响 | 第88页 |
| 3 讨论 | 第88-89页 |
| 第2节 肠粘膜炎症蛋白免疫组化分析 | 第89-93页 |
| 1 材料与方法 | 第89-90页 |
| 1.1 试验动物 | 第89页 |
| 1.2 肠粘膜免疫组化分析 | 第89-90页 |
| 2 实验结果 | 第90-91页 |
| 2.1 NAM对肠粘膜分泌iNOS炎症蛋白的影响 | 第90页 |
| 2.2 NAM对肠粘膜分泌COX-2炎症蛋白的影响 | 第90-91页 |
| 3 讨论 | 第91-93页 |
| 第6章 结论 | 第93-95页 |
| 附录 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
