| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 第一章 研究背景介绍 | 第15-46页 |
| 1.1 腹壁发育概述 | 第15-26页 |
| 1.1.1 腹壁发育过程 | 第15-23页 |
| 1.1.2 腹壁发育的缺陷 | 第23-26页 |
| 1.2 骨髓干细胞的概述 | 第26-32页 |
| 1.2.1 骨髓间充质干细胞概述 | 第27-29页 |
| 1.2.2 造血干细胞的分化及其微环境 | 第29-32页 |
| 1.3 Wnt信号通路概述 | 第32-46页 |
| 1.3.1 Wnt信号通路简介 | 第32-37页 |
| 1.3.2 Wnt信号通路在腹壁发育中的作用 | 第37-40页 |
| 1.3.3 Wnt信号通路在干细胞发育中的作用 | 第40-46页 |
| 第二章 实验方法 | 第46-71页 |
| 2.1 分子生物学实验方法 | 第46-50页 |
| 2.1.1 分子克隆 | 第46-47页 |
| 2.1.2 组织蛋白提取与Western Blot检测 | 第47-48页 |
| 2.1.3 RNA抽提、反转录和定量PCR | 第48-50页 |
| 2.2 细胞生物学实验方法 | 第50-54页 |
| 2.2.1 普通细胞培养 | 第50-51页 |
| 2.2.2 MSC细胞分离和培养 | 第51页 |
| 2.2.3 MSC细胞诱导分化 | 第51-54页 |
| 2.3 实验动物学方法 | 第54-56页 |
| 2.3.1 实验动物设施 | 第54页 |
| 2.3.2 实验小鼠 | 第54-55页 |
| 2.3.3 小鼠或胚胎基因分型 | 第55-56页 |
| 2.4 胚胎相关实验方法 | 第56-61页 |
| 2.4.1 胚胎整体原位杂交 | 第56-60页 |
| 2.4.2 胚胎整体X-gal染色 | 第60-61页 |
| 2.5 组织相关实验方法 | 第61-69页 |
| 2.5.1 组织包埋和组织切片 | 第61-62页 |
| 2.5.2 组织切片染色 | 第62-64页 |
| 2.5.3 组织切片免疫荧光 | 第64-67页 |
| 2.5.4 组织切片原位杂交 | 第67-69页 |
| 2.6 FACS实验方法 | 第69-71页 |
| 第三章 腹壁外胚层的Wnt信号通路调控腹壁的发育 | 第71-105页 |
| 3.1 前言 | 第71-72页 |
| 3.2 实验结果 | 第72-97页 |
| 3.2.1 腹壁多种Wnt蛋白和Wntless的表达 | 第72-76页 |
| 3.2.2 Msx2-Cre; Wlsc/c条件敲除小鼠构建和敲除效率的验证 | 第76-77页 |
| 3.2.3 Msx2-Cre; Wlsc/c条件敲除小鼠腹壁发育严重受损 | 第77-80页 |
| 3.2.4 Msx2-Cre; Wlsc/c条件敲除小鼠腹壁中胚层分化缺陷 | 第80-82页 |
| 3.2.5 Msx2-Cre; Wlsc/c条件敲除小鼠腹壁经典Wnt信号通路受阻 | 第82-85页 |
| 3.2.6 外胚层失活 β-catenin没有明显影响腹壁的发育 | 第85-87页 |
| 3.2.7 Msx2-Cre; Wlsc/c条件敲除小鼠腹壁肌肉细胞的增殖和凋亡没有受到影响 | 第87-89页 |
| 3.2.8 Msx2-Cre; Wlsc/c条件敲除小鼠腹壁Wnt-pitx2信号受损 | 第89-90页 |
| 3.2.9 Wnt5a敲除鼠没有明显影响腹壁的发育 | 第90-91页 |
| 3.2.10 Msx2-Cre; Wlsc/c条件敲除小鼠眼睑发育异常 | 第91-94页 |
| 3.2.11 Wnt5a-/-敲除鼠眼睑不能正常闭合 | 第94-97页 |
| 3.3 讨论 | 第97-102页 |
| 3.3.1 外胚层的Wnt蛋白通过旁分泌途径调控中胚层细胞的命运 | 第98-100页 |
| 3.3.2 Wnt-Pitx2对于多组织肌肉发生可能有着统一调控机制 | 第100页 |
| 3.3.3 Wnt5a在腹壁和眼睑发育过程中的作用分析 | 第100-101页 |
| 3.3.4 腹壁发育缺陷疾病的病理学因素探讨 | 第101-102页 |
| 3.4 总结与展望 | 第102-105页 |
| 3.4.1 总结 | 第102-103页 |
| 3.4.2 展望 | 第103-105页 |
| 第四章 MSC的Wnt信号调控MSC的自我更新与分化 | 第105-128页 |
| 4.1 前言 | 第105-106页 |
| 4.2 实验结果 | 第106-123页 |
| 4.2.1 MSC中Wnt蛋白的相对表达 | 第106-107页 |
| 4.2.2 Nestin-Cre;Wlsc/c条件敲除小鼠构建 | 第107页 |
| 4.2.3 Nestin-Cre; Wlsc/c条件敲除小鼠成骨分化受到抑制 | 第107-111页 |
| 4.2.4 Nestin-Cre敲除Wntless促进了MSC的成脂分化能力 | 第111-113页 |
| 4.2.5 Nestin-Cre敲除Wntless促进了MSC的自我更新能力 | 第113-114页 |
| 4.2.6 Nestin-Cre;Wlsc/c敲除小鼠免疫相关细胞发育缺陷 | 第114-120页 |
| 4.2.7 Nestin-Cre; Wlsc/c小鼠出生后7天时的表型分析 | 第120-122页 |
| 4.2.8 Nestin-Cre;Wlsc/c敲除小鼠造血相关因子的变化 | 第122-123页 |
| 4.3 讨论 | 第123-126页 |
| 4.3.1 MSC中的Wnt蛋白可以影响MSC的成骨成脂分化 | 第123页 |
| 4.3.2 MSC中的Wnt蛋白分泌受阻促进了MSC的自我更新 | 第123-124页 |
| 4.3.3 MSC的Wnt信号通路贡献于HSC的微环境 | 第124-125页 |
| 4.3.4 Nestin-Cre敲除Wntless的表型可能与神经发育相关 | 第125-126页 |
| 4.4 总结与展望 | 第126-128页 |
| 4.4.1 总结 | 第126页 |
| 4.4.2 展望 | 第126-128页 |
| 参考文献 | 第128-150页 |
| 附录 英文缩略语 | 第150-153页 |
| 攻读博士学位期间已发表或录用的论文 | 第153-155页 |
| 致谢 | 第155页 |
