| 目录 | 第4-10页 |
| 第一部分：P53高通量筛选模型的建立 | 第10-57页 |
| 英文缩略词 | 第11-12页 |
| 中文摘要 | 第12-13页 |
| 英文摘要 | 第13-15页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 实验材料和方法 | 第17-25页 |
| 实验材料 | 第17-20页 |
| 实验方法 | 第20-25页 |
| 实验结果 | 第25-36页 |
| 一、表达载体pGL3-P53的构建及荧光素酶活性检测 | 第25-29页 |
| 1.表达载体pGL3-P53的构建 | 第25页 |
| 2.酶切,电泳鉴定 | 第25-28页 |
| 3.测序 | 第28-29页 |
| 4.化学发光检测pGL3-P53瞬时转染MCF-7细胞荧光素酶表达 | 第29页 |
| 二、真核稳定表达载体P53-luc-pcDNA3的构建 | 第29-32页 |
| 1.载体构建 | 第29-31页 |
| 2.测序 | 第31-32页 |
| 三、真核细胞的转染和模型鉴定 | 第32-34页 |
| 1.转染真核细胞 | 第32页 |
| 2.ADM作用下P53R-MCF-7和P53R-A2780细胞P53的表达 | 第32页 |
| 3.化学发光检测药物作用下P53R-MCF-7和P53R-A2780细胞荧光素酶表达 | 第32-34页 |
| 四、不同化合物对P53蛋白表达的影响 | 第34-36页 |
| 讨论 | 第36-40页 |
| 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-44页 |
| 综述 | 第44-57页 |
| 第二部分：42-5治疗肾功能不全作用及作用机制研究 | 第57-210页 |
| 英文缩略词 | 第58-60页 |
| 中文摘要 | 第60-63页 |
| 英文摘要 | 第63-67页 |
| 前言 | 第67-69页 |
| 一、对肾功能不全的治疗作用 | 第69-121页 |
| (一) 化合物对Cisplatin所致小鼠急性肾损伤的保护作用 | 第69-77页 |
| 实验材料和方法 | 第69-70页 |
| 结果 | 第70-76页 |
| 小结 | 第76-77页 |
| (二) 42-5在体外对Cisplatin所引起肾脏细胞损伤的保护作用 | 第77-82页 |
| 实验材料 | 第77-78页 |
| 实验方法 | 第78-79页 |
| 结果 | 第79-81页 |
| 1.42-5与Cisplatin合用对大鼠肾系膜系细胞rMCs生长的影响 | 第79-80页 |
| 2.42-5与Cisplatin合用对人肾小管上皮细胞HKC生长的影响 | 第80-81页 |
| 小结 | 第81-82页 |
| (三) 42-5对Cisplatin所致大鼠急性肾损伤的保护作用 | 第82-91页 |
| 实验材料和方法 | 第82-85页 |
| 结果 | 第85-89页 |
| 1.42-5对Cisplatin所致急性肾损伤大鼠血清生化(BUN及Scr)水平的影响 | 第85-86页 |
| 2.42-5对Cisplatin所致急性肾损伤大鼠尿蛋白(UP)水平的影响 | 第86页 |
| 3.42-5对Cisplatin所致急性肾损伤大鼠体重及肾脏指数的影响 | 第86-87页 |
| 4.42-5对Cisplatin所致急性肾损伤大鼠肾脏病理学改变的影响 | 第87-89页 |
| 小结 | 第89-91页 |
| (四) 42-5对大鼠5／6肾切除所致慢性肾功能不全的影响 | 第91-105页 |
| 实验材料和方法 | 第91-94页 |
| 结果 | 第94-102页 |
| 1.42-5对5／6肾切除模型大鼠BUN水平的影响 | 第94页 |
| 2.42-5对5／6肾切除模型大鼠Scr水平的影响 | 第94-97页 |
| 3.42-5对5／6肾切除模型大鼠尿蛋白(UP)水平的影响 | 第97页 |
| 4.42-5对5／6肾切除模型大鼠体重的影响 | 第97-99页 |
| 5.42-5对5／6肾切除模型大鼠心脏指数的影响 | 第99-100页 |
| 6.42-5对5／6肾切除模型大鼠肾脏病理学改变的影响 | 第100-102页 |
| 小结 | 第102-105页 |
| (五) 42-5对链脲霉素(STZ)所致大鼠糖尿病肾病的影响 | 第105-121页 |
| 实验材料和方法 | 第105-108页 |
| 结果 | 第108-118页 |
| 1.42-5对STZ所致糖尿病肾病大鼠血糖水平的影响 | 第108页 |
| 2.42-5对STZ所致糖尿病肾病大鼠BUN水平的影响 | 第108页 |
| 3.42-5对STZ所致糖尿病肾病大鼠Scr水平的影响 | 第108-112页 |
| 4.42-5对STZ所致糖尿病肾病大鼠尿蛋白水平的影响 | 第112页 |
| 5.42-5对STZ所致糖尿病肾病大鼠尿肌酐水平的影响 | 第112-113页 |
| 6.42-5对STZ所致糖尿病肾病大鼠体重的影响 | 第113-115页 |
| 7.42-5对STZ所致糖尿病肾病大鼠脏器指数的影响 | 第115页 |
| 8.42-5对STZ所致糖尿病肾病大鼠血压的影响 | 第115-116页 |
| 9.42-5对STZ所致糖尿病肾病大鼠肾脏病理学改变的影响 | 第116-118页 |
| 小结 | 第118-121页 |
| 二、42-5治疗肾功能不全的作用机制研究 | 第121-177页 |
| 实验材料 | 第121-124页 |
| 实验方法 | 第124-141页 |
| 结果 | 第141-176页 |
| (一) 42-5对细胞凋亡的影响 | 第141-147页 |
| 1.荧光显微镜检测凋亡细胞 | 第141页 |
| 2.42-5对Cisplatin诱导的HKC细胞染色体DNA断裂的影响 | 第141-143页 |
| 3.FCM检测42-5对Cisplatin诱导的HKC细胞凋亡及细胞周期的影响 | 第143-147页 |
| (二) 抗氧化作用 | 第147-151页 |
| 1.42-5对Fe~(2+)-L-cystine诱发肝微粒体脂质过氧化的影响 | 第147-148页 |
| 2.42-5对Cisplatin所致急性肾损伤大鼠肾组织脂质过氧化的影响 | 第148-149页 |
| 3.42-5对Cisplatin所致急性肾损伤大鼠肾组织谷胱甘肽(GSH)水平的影响 | 第149-151页 |
| (三) 与肾素-血管紧张素-TGF-β_1通路相关的机制 | 第151-164页 |
| 1.对TGF-β_1受体结合试验的拮抗作用 | 第151页 |
| 2.42-5对Cisplatin致急性肾损伤大鼠血浆TGF-β_1升高的抑制作用 | 第151-152页 |
| 3.42-5对5／6肾切除大鼠血浆TGF-β_1水平的影响 | 第152-153页 |
| 4.RT-PCR观察42-5对Cisplatin所致急性肾损伤大鼠肾组织TGF-β_1 mRNA表达的影响 | 第153-155页 |
| 5.免疫组织化学染色检测42-5对Cisplatin致急性肾损伤大鼠肾脏组织TGF-β_1表达的影响 | 第155页 |
| 6.免疫组织化学染色检测42-5对5／6肾切除大鼠肾脏组织TGF-β_1表达的影响 | 第155-156页 |
| 7.免疫组织化学染色检测42-5对STZ所致糖尿病大鼠肾脏组织TGF-β_1表达的影响 | 第156-159页 |
| 8.42-5对Cisplatin所致急性肾损伤大鼠血浆Ang Ⅱ水平的影响 | 第159-160页 |
| 9.42-5对5／6肾切除大鼠血浆Ang Ⅱ水平的影响 | 第160-161页 |
| 10.42-5对STZ所致糖尿病肾病大鼠血浆Ang Ⅱ水平的影响 | 第161页 |
| 11.体外检测42-5对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制作用 | 第161-162页 |
| 12.42-5对STZ所致糖尿病肾病大鼠血浆肾素活性的影响 | 第162-164页 |
| (四) 与细胞外基质及分解相关的机制 | 第164-172页 |
| 1.底物酶谱法分析42-5对大鼠肾系膜细胞(rMC)分泌基质金属蛋白酶能力的影响 | 第164-165页 |
| 2.RT-PCR评价HKC细胞uPA mRNA的表达水平 | 第165页 |
| 3.RT-PCR评价HKC细胞MMP-2 mRNA的表达水平 | 第165页 |
| 4.RT-PCR评价HKC细胞TIMP-1 mRNA的表达水平 | 第165-167页 |
| 5.免疫组织化学染色检测42-5对5／6肾切除大鼠肾脏组织Fibronectin表达的影响 | 第167页 |
| 6.免疫组织化学染色检测42-5对STZ所致糖尿病大鼠肾脏组织Fibronectin表达的影响 | 第167-168页 |
| 7 免疫组织化学染色检测42-5对5／6肾切除大鼠肾脏组织Collagen Ⅳ表达的影响 | 第168-172页 |
| (五) 42-5对TGF-β_1诱导的HKC转分化的影响 | 第172-176页 |
| 1.细胞形态的变化 | 第172页 |
| 2.免疫荧光染色观察42-5对HKC细胞α-SMA表达变化 | 第172页 |
| 3.流式细胞仪检测阳性表达α-SMA蛋白的HKC细胞百分比 | 第172-176页 |
| 小结 | 第176-177页 |
| 三、42-5初步毒理学研究 | 第177-185页 |
| 实验材料 | 第177-178页 |
| 实验方法 | 第178-182页 |
| 结果 | 第182-184页 |
| 1.MTT法观察42-5对细胞生长的影响 | 第182页 |
| 2.小鼠口服给药急性毒性实验 | 第182页 |
| 3.鼠伤寒沙门氏菌营养缺陷型回复突变Ames试验 | 第182-184页 |
| 4.啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞微核实验 | 第184页 |
| 小结 | 第184-185页 |
| 讨论 | 第185-194页 |
| 结论 | 第194-195页 |
| 参考文献 | 第195-204页 |
| 综述 | 第204-210页 |
| 致谢 | 第210-213页 |
| 个人简历 | 第213-214页 |
