| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 1 绪论 | 第13-22页 |
| 1.1 油桐简介 | 第13-14页 |
| 1.1.1 油桐生物学特性 | 第13页 |
| 1.1.2 油桐的价值与应用 | 第13-14页 |
| 1.2 植物脂肪酸 | 第14-15页 |
| 1.2.1 植物脂肪酸的种类 | 第14页 |
| 1.2.2 植物脂肪酸的功能作用 | 第14页 |
| 1.2.3 植物脂肪酸的β-氧化 | 第14-15页 |
| 1.3 长链脂酰辅酶A合成酶家族研究进展 | 第15-20页 |
| 1.3.1 长链脂酰辅酶A合成酶的作用 | 第15-16页 |
| 1.3.2 长链脂酰辅酶A合成酶的酶学特性 | 第16页 |
| 1.3.3 长链脂酰辅酶A合成酶对底物的选择性 | 第16-17页 |
| 1.3.4 长链脂酰辅酶A合成酶的国内外研究现状 | 第17-20页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第20-21页 |
| 1.5 技术路线 | 第21-22页 |
| 2 油桐LACS基因的cDNA克隆及生物信息学分析 | 第22-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 载体与菌株 | 第22-23页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 实验设备 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-30页 |
| 2.2.1 油桐种子总RNA的制备 | 第23-24页 |
| 2.2.2 cDNA第一链的反转录合成 | 第24-25页 |
| 2.2.3 油桐LACS基因的序列搜索 | 第25-26页 |
| 2.2.4 油桐LACS基因的克隆引物设计 | 第26页 |
| 2.2.5 PCR扩增体系和扩增程序 | 第26-27页 |
| 2.2.6 PCR扩增产物的检测与回收 | 第27-28页 |
| 2.2.7 回收产物的连接和重组子的转化 | 第28-29页 |
| 2.2.8 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第29页 |
| 2.2.9 基因生物信息学分析 | 第29-30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-44页 |
| 2.3.1 油桐总RNA的提取和第一链cDNA的制备 | 第30页 |
| 2.3.2 油桐VfLACS6基因的cDNA克隆和生物信息学分析 | 第30-37页 |
| 2.3.3 油桐VfLACS7基因的cDNA克隆和生物信息学分析 | 第37-44页 |
| 2.4 讨论 | 第44-46页 |
| 3 油桐LACS基因的原核表达分析 | 第46-56页 |
| 3.1 实验材料 | 第46-47页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第46页 |
| 3.1.2 菌株与质粒 | 第46页 |
| 3.1.3 试剂与药品 | 第46-47页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-50页 |
| 3.2.1 表达载体制备 | 第47-48页 |
| 3.2.2 表达引物的设计 | 第48页 |
| 3.2.3 基因表达片段的制备 | 第48页 |
| 3.2.4 基因表达片段的克隆 | 第48页 |
| 3.2.5 原核表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 3.2.6 诱导表达及SDS-PAGE电泳检测 | 第49-50页 |
| 3.3 结果分析 | 第50-55页 |
| 3.3.1 表达载体的质粒提取 | 第50-51页 |
| 3.3.2 油桐VfLACS4基因的原核表达 | 第51-52页 |
| 3.3.3 油桐VfLACS6基因的原核表达 | 第52-54页 |
| 3.3.4 油桐VfLACS7基因的原核表达 | 第54-55页 |
| 3.4 讨论 | 第55-56页 |
| 4 油桐LACS基因的酵母表达分析 | 第56-70页 |
| 4.1 实验材料 | 第56-57页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第56页 |
| 4.1.2 菌株与质粒 | 第56-57页 |
| 4.1.3 试剂与药品 | 第57页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第57页 |
| 4.1.5 主要培养基 | 第57页 |
| 4.2 实验方法 | 第57-62页 |
| 4.2.1 表达载体制备 | 第57页 |
| 4.2.2 表达引物的设计 | 第57-58页 |
| 4.2.3 基因表达片段的制备 | 第58-59页 |
| 4.2.4 基因表达片段的克隆 | 第59页 |
| 4.2.5 酵母表达载体的构建 | 第59-60页 |
| 4.2.6 酵母感受态制备及其转化 | 第60-61页 |
| 4.2.7 酵母转化子的筛选与鉴定 | 第61-62页 |
| 4.2.8 酵母诱导表达与生长曲线的测定 | 第62页 |
| 4.2.9 SDS-PAGE电泳分析 | 第62页 |
| 4.3 结果分析 | 第62-69页 |
| 4.3.1 表达载体的质粒提取 | 第62-63页 |
| 4.3.2 油桐VfLACS4基因的酵母表达 | 第63-65页 |
| 4.3.3 油桐VfLACS6基因的酵母表达 | 第65-67页 |
| 4.3.4 油桐VfLACS7基因的酵母表达 | 第67-69页 |
| 4.4 讨论 | 第69-70页 |
| 5 油桐LACS蛋白家族两个成员之间的互作关系分析 | 第70-80页 |
| 5.1 实验材料 | 第70-71页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第70页 |
| 5.1.2 菌株与质粒 | 第70-71页 |
| 5.1.3 试剂与药品 | 第71页 |
| 5.1.4 主要实验设备 | 第71页 |
| 5.2 实验方法 | 第71-76页 |
| 5.2.1 诱导载体和文库载体的构建 | 第71页 |
| 5.2.2 载体的引物设计 | 第71-72页 |
| 5.2.3 基因表达片段的制备 | 第72-73页 |
| 5.2.4 基因表达片段的克隆 | 第73页 |
| 5.2.5 诱饵载体的构建 | 第73-74页 |
| 5.2.6 文库载体的构建 | 第74页 |
| 5.2.7 酵母感受态制备及其转化 | 第74-75页 |
| 5.2.8 酵母载体的共转化 | 第75-76页 |
| 5.3 结果与分析 | 第76-79页 |
| 5.3.1 酵母载体的构建 | 第76-78页 |
| 5.3.2 VfLACS6和VfLACS7蛋白的互作关系分析 | 第78-79页 |
| 5.4 讨论 | 第79-80页 |
| 6 油桐VfLACS6和VfLACS7基因时空表达 | 第80-90页 |
| 6.1 实验材料 | 第80页 |
| 6.1.1 植物材料 | 第80页 |
| 6.1.2 菌株与质粒 | 第80页 |
| 6.1.3 试剂与药品 | 第80页 |
| 6.1.4 主要仪器设备 | 第80页 |
| 6.2 实验方法 | 第80-84页 |
| 6.2.1 油桐不同组织、器官和种子不同发育时期总RNA的提取 | 第81页 |
| 6.2.2 荧光定量反转录第一链cDNA的合成 | 第81-82页 |
| 6.2.3 荧光定量内参基因的筛选 | 第82页 |
| 6.2.4 荧光定量特异性引物的设计 | 第82页 |
| 6.2.5 荧光定量内参基因和目的片段的克隆 | 第82页 |
| 6.2.6 荧光定量特异性引物检测 | 第82-83页 |
| 6.2.7 标准曲线的制备 | 第83页 |
| 6.2.8 荧光定量数据分析 | 第83-84页 |
| 6.3 结果与分析 | 第84-89页 |
| 6.3.1 总RNA的提取 | 第84页 |
| 6.3.2 内参基因和目的基因的克隆 | 第84-85页 |
| 6.3.3 荧光定量引物特异性检测 | 第85页 |
| 6.3.4 油桐LACS基因与内参基因标准曲线制备 | 第85-86页 |
| 6.3.5 油桐LACS基因的时空表达模式分析 | 第86-89页 |
| 6.4 讨论 | 第89-90页 |
| 7 总结 | 第90-93页 |
| 7.1 结论 | 第90页 |
| 7.2 创新点 | 第90-91页 |
| 7.3 研究展望 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-101页 |
| 附录A: 常用药品配方 | 第101-105页 |
| 附录B 攻读硕士学位期间的主要学术成果 | 第105-107页 |
| 致谢 | 第107页 |
