| 中文摘要 | 第11-15页 |
| Abstract | 第15-20页 |
| 缩略词 | 第21-22页 |
| 前言 | 第22-31页 |
| 1 鼠疫菌的研究进展 | 第22-26页 |
| 1.1 鼠疫的流行及危害 | 第22-23页 |
| 1.2 鼠疫菌的生物学特性及致病机制 | 第23-24页 |
| 1.3 鼠疫菌常规检测技术现状 | 第24-26页 |
| 1.3.1 细菌学检测 | 第24页 |
| 1.3.2 免疫学检测 | 第24-25页 |
| 1.3.3 分子生物学检测 | 第25-26页 |
| 2 环介导恒温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification of DNA, LAMP） | 第26-27页 |
| 2.1 环介导恒温扩增技术的原理 | 第26页 |
| 2.2 环介导恒温扩增技术的应用 | 第26-27页 |
| 3 免疫磁珠技术（ immunomagnetic beads techniquces） | 第27-29页 |
| 3.1 免疫磁珠技术的原理 | 第27-28页 |
| 3.2 免疫磁珠技术的应用 | 第28-29页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第29页 |
| 5 本研究的内容 | 第29-31页 |
| 第一章 鼠疫菌LAMP最佳引物的筛选 | 第31-43页 |
| 1 引言 | 第31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-35页 |
| 2.1 材料 | 第31-32页 |
| 2.1.1 仪器和试剂 | 第31页 |
| 2.1.2 实验菌株 | 第31-32页 |
| 2.2 方法 | 第32-35页 |
| 2.2.1 LAMP引物设计与合成 | 第32-34页 |
| 2.2.2 DNA模板的制备 | 第34页 |
| 2.2.3 LAMP反应体系及扩增条件 | 第34页 |
| 2.2.4 LAMP扩增反应检测 | 第34-35页 |
| 2.2.5 特异性试验 | 第35页 |
| 2.2.6 灵敏度实验 | 第35页 |
| 3 结果与讨论 | 第35-41页 |
| 3.1 最佳引物筛选 | 第35-36页 |
| 3.2 最佳环引物筛选 | 第36-37页 |
| 3.3 特异性实验 | 第37-39页 |
| 3.4 LAMP检测鼠疫菌的灵敏度 | 第39-41页 |
| 4 结论 | 第41-43页 |
| 第二章 环介导恒温扩增体系的建立 | 第43-58页 |
| 1 引言 | 第43页 |
| 2 材料与方法 | 第43-47页 |
| 2.1 材料 | 第43-44页 |
| 2.1.1 仪器和试剂 | 第43页 |
| 2.1.2 菌株 | 第43-44页 |
| 2.2 方法 | 第44-47页 |
| 2.2.1 DNA模板的制备 | 第44页 |
| 2.2.2 LAMP反应体系及扩增条件 | 第44页 |
| 2.2.3 常规PCR反应体系及扩增条件 | 第44-45页 |
| 2.2.4 LAMP自建体系中Mg2+加入量优化 | 第45页 |
| 2.2.5 LAMP自建体系中dNTPs加入量优化 | 第45页 |
| 2.2.6 LAMP自建体系中Bst DNA聚合酶加入量优化 | 第45页 |
| 2.2.7 LAMP扩增鼠疫菌灵敏度检测 | 第45-46页 |
| 2.2.8 LAMP扩增鼠疫菌特异性检测 | 第46页 |
| 2.2.9 LAMP扩增11株耶尔森氏菌混合菌液检测 | 第46页 |
| 2.2.10 小鼠脏器干扰实验 | 第46-47页 |
| 3 结果与讨论 | 第47-57页 |
| 3.1 LAMP自建体系中Mg2+加入量优化 | 第47页 |
| 3.2 LAMP自建体系中dNTPs加入量优化 | 第47-48页 |
| 3.3 LAMP自建体系中Bst DNA聚合酶加入量优化 | 第48-49页 |
| 3.4 LAMP扩增鼠疫菌灵敏度检测 | 第49-50页 |
| 3.5 LAMP扩增鼠疫菌特异性检测 | 第50-52页 |
| 3.6 LAMP扩增11株耶尔森氏菌混合菌液检测 | 第52-53页 |
| 3.7 小鼠脏器干扰实验 | 第53-57页 |
| 4 结论 | 第57-58页 |
| 第三章 磁珠捕获DNA法结合环介导恒温扩增技术的建立并用于检测鼠疫耶尔森氏菌 | 第58-75页 |
| 1 引言 | 第58页 |
| 2 材料与方法 | 第58-62页 |
| 2.1 材料 | 第58-59页 |
| 2.1.1 试剂和仪器 | 第58-59页 |
| 2.1.2 菌株 | 第59页 |
| 2.1.3 实验动物 | 第59页 |
| 2.2 方法 | 第59-62页 |
| 2.2.1 DNA模板的制备 | 第59页 |
| 2.2.2 LAMP反应体系及扩增条件 | 第59页 |
| 2.2.3 常规PCR反应体系及扩增条件 | 第59-60页 |
| 2.2.4 磁珠捕获DNA | 第60页 |
| 2.2.5 磁珠捕获DNA法结合环介导恒温扩增技术检测混合菌液中DNA | 第60-61页 |
| 2.2.6 磁珠捕获DNA体系优化 | 第61页 |
| 2.2.7 磁珠捕获DNA法结合环介导恒温扩增技术用于小鼠脏器干扰实验 | 第61-62页 |
| 3 结果与讨论 | 第62-74页 |
| 3.1 磁珠捕获DNA法结合环介导恒温扩增技术检测混合菌液中DNA | 第62-64页 |
| 3.2 磁珠捕获DNA体系优化 | 第64-69页 |
| 3.3 磁珠捕获DNA法结合环介导恒温扩增技术用于小鼠脏器干扰实验 | 第69-74页 |
| 4 结论 | 第74-75页 |
| 第四章 免疫磁珠捕获菌体法结合环介导恒温扩增技术的建立并用于检测鼠疫耶尔森氏菌 | 第75-109页 |
| 第一部分 基于鼠疫菌F1抗体制备免疫磁珠结合环介导恒温扩增技术的建立及应用 | 第75-97页 |
| 1. 引言 | 第75页 |
| 2. 材料与方法 | 第75-82页 |
| 2.1 材料 | 第75-76页 |
| 2.1.1 试剂与仪器 | 第75-76页 |
| 2.1.2 菌株 | 第76页 |
| 2.1.3 实验动物 | 第76页 |
| 2.2 方法 | 第76-82页 |
| 2.2.1 合成 | 第76-77页 |
| 2.2.2 免疫磁珠制备及菌体的捕获 | 第77-79页 |
| 2.2.3 LAMP反应体系及扩增条件 | 第79页 |
| 2.2.4 应体系及扩增条件 | 第79-80页 |
| 2.2.5 免疫磁珠捕获鼠疫菌灵敏度检测 | 第80页 |
| 2.2.6 免疫磁珠捕获鼠疫菌特异性检测 | 第80页 |
| 2.2.7 免疫磁珠偶联抗体量优化 | 第80-81页 |
| 2.2.8 捕获菌体所用免疫磁珠量优化 | 第81页 |
| 2.2.9 脏器掺菌实验 | 第81-82页 |
| 2.2.10 实际样本检测 | 第82页 |
| 3 结果与讨论 | 第82-96页 |
| 3.1 免疫磁珠捕获鼠疫菌灵敏度检测 | 第82-84页 |
| 3.2 免疫磁珠捕获鼠疫菌特异性检测 | 第84-86页 |
| 3.3 免疫磁珠偶联抗体量优化 | 第86-88页 |
| 3.4 捕获菌体所用免疫磁珠量优化 | 第88-90页 |
| 3.5 脏器掺菌实验 | 第90-94页 |
| 3.6 实际样本检测 | 第94-96页 |
| 4 结论 | 第96-97页 |
| 第二部分 鼠疫菌（26℃培养）单克隆抗体的制备及应用 | 第97-109页 |
| 1. 引言 | 第97页 |
| 2. 材料与方法 | 第97-104页 |
| 2.1 材料 | 第97-99页 |
| 2.1.1 仪器与试剂 | 第97-99页 |
| 2.1.2 菌株 | 第99页 |
| 2.1.3 实验动物 | 第99页 |
| 2.2 方法 | 第99-104页 |
| 2.2.1 免疫原的制备 | 第99页 |
| 2.2.2 单克隆抗体的制备 | 第99-102页 |
| 2.2.3 抗体浓度及效价的测定 | 第102-103页 |
| 2.2.4 抗体鉴定 | 第103-104页 |
| 2.2.5 免疫磁珠结合LAMP技术检测鼠疫菌（26℃培养）体系的建立及评价 | 第104页 |
| 3. 结果与讨论 | 第104-108页 |
| 3.1 单克隆抗体浓度和效价 | 第104-105页 |
| 3.2 单克隆抗体分型鉴定 | 第105页 |
| 3.3 单克隆抗体特异性鉴定 | 第105页 |
| 3.4 免疫磁珠捕获鼠疫菌灵敏度检测 | 第105-108页 |
| 4. 结论 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-115页 |
| 附录 | 第115-117页 |
| 主要仪器 | 第115-116页 |
| 常用试剂及配制方法 | 第116-117页 |
| 个人简历 | 第117-118页 |
| 主要学习经历 | 第117页 |
| 攻读硕士研究生期间获得的奖励 | 第117-118页 |
| 在学期间的研究成果目录 | 第118页 |
| 承担课题 | 第118-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 综述 | 第120-125页 |
| 参考文献 | 第123-125页 |
| 发表文章 | 第125-129页 |
