| 中文摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 第一章 综述 | 第11-21页 |
| 1.1 基因敲除技术概述 | 第11页 |
| 1.2 ZFN(锌指核酸酶) | 第11-13页 |
| 1.3 TALEN及CRISPR/Cas9 | 第13-21页 |
| 1.3.1 TALEN(转录因子类似效应核酸酶) | 第13-15页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cas9(规律成簇间隔短回文重复) | 第15-19页 |
| 1.3.3 TALEN和CRISPR/Cas9系统工具 | 第19页 |
| 1.3.4 TALEN和CRISPR/Cas9前景 | 第19-21页 |
| 第二章 使用CRISPR/Cas9敲除斑马鱼基因aftpha、sertad2a、si：ch73-131e21.5、pane1和si:ch211-89o9.6 | 第21-64页 |
| 2.1 前言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料和实验方法 | 第21-39页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第21-22页 |
| 2.2.2 载体、菌株、工具酶和试剂盒 | 第22页 |
| 2.2.3 其它试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.4 实验所用仪器 | 第23-24页 |
| 2.2.5 实验方法 | 第24-39页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第39-64页 |
| 2.3.1 aftpha、seriad2ct、si:ch73-131e21.5、panel、si:ch211-89o9.6 基因序列获得 | 第39-45页 |
| 2.3.2 确定Cas9靶位点及引物 | 第45-49页 |
| 2.3.3 构建gRNA体外转录载体 | 第49-50页 |
| 2.3.4 gRNA转录载体线性化 | 第50-51页 |
| 2.3.5 体外转录gRNA及纯化 | 第51-52页 |
| 2.3.6 构建Cas9体外转录模板 | 第52页 |
| 2.3.7 Cas9 mRNA的合成与纯化 | 第52-53页 |
| 2.3.8 靶位点有效性检测 | 第53-55页 |
| 2.3.9 F0代有效性检测 | 第55-57页 |
| 2.3.10 F1代突变体筛选 | 第57-64页 |
| 第三章 使用TALEN技术敲除斑马鱼rsph3及rsph4a基因 | 第64-81页 |
| 3.1 前言 | 第64页 |
| 3.2 实验材料和实验方法 | 第64-72页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第64页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第64-72页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第72-81页 |
| 3.3.1 rsph3及rsph4a基因序列获得 | 第72-74页 |
| 3.3.2 确定TALEN靶位点及引物 | 第74-75页 |
| 3.3.3 构建TALEN左右臂十连体及五连体 | 第75-76页 |
| 3.3.4 构建TALEN左右臂十六连体 | 第76-77页 |
| 3.3.5 转录模板线性化 | 第77-78页 |
| 3.3.6 TALEN mRNA体外转录及纯化 | 第78页 |
| 3.3.7 注射后F0代胚胎检测 | 第78-81页 |
| 参考文献 | 第81-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 学术论文评阅及答辩情况表 | 第93页 |
