| 摘要 | 第13-17页 |
| ABSTRACT | 第17-19页 |
| 符号说明及缩写词 | 第20-23页 |
| 第一章 文献综述 | 第23-35页 |
| 1.1 粘细菌和其社会性行为 | 第23-28页 |
| 1.1.1 粘细菌的S运动 | 第24-27页 |
| 1.1.1.1 细菌的四型菌毛 | 第24-26页 |
| 1.1.1.2 粘球菌的胞外多糖 | 第26-27页 |
| 1.1.2 粘细菌生物膜的形成 | 第27-28页 |
| 1.1.3 粘细菌子实体的形成 | 第28页 |
| 1.2 海洋耐盐粘球菌 | 第28-30页 |
| 1.2.1 HW-1的发现及对海水环境的适应 | 第29页 |
| 1.2.2 HW-1在海水条件下的S运动增强 | 第29-30页 |
| 1.3 mts基因簇的发现及作用 | 第30-32页 |
| 1.3.1 HW-1的S运动缺陷突变株HL-1的发现 | 第30-31页 |
| 1.3.2 mts基因簇的命名及DK1622中同源基因的确定 | 第31页 |
| 1.3.3 DK1622中插入失活突变株和单敲除突变株的构建及性质分析 | 第31-32页 |
| 1.4 本论文的开展思路及研究内容 | 第32-35页 |
| 第二章 海水条件下HW-1社会性行为增强的表型分析 | 第35-49页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-40页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第35-36页 |
| 2.1.2 主要培养基及试剂 | 第36-38页 |
| 2.1.3 仪器设备与耗材 | 第38-40页 |
| 2.2 实验方法 | 第40-41页 |
| 2.2.1 海水条件下各菌株的S运动分析 | 第40页 |
| 2.2.2 海水条件下各菌株的EPS产生能力分析 | 第40-41页 |
| 2.2.2.1 细胞外基质染料结合能力实验 | 第40-41页 |
| 2.2.2.2 胞外多糖含量检测-钙荧光白染色法 | 第41页 |
| 2.2.3 海水条件下各菌株的生物膜形成能力分析 | 第41页 |
| 2.3 实验结果和分析 | 第41-46页 |
| 2.3.1 海水条件下各菌株的S运动分析 | 第41-43页 |
| 2.3.2 海水条件下各菌株的EPS产生能力分析 | 第43-46页 |
| 2.3.3 海水条件下各菌株的生物膜形成能力分析 | 第46页 |
| 2.4 本章小结 | 第46-49页 |
| 第三章 mts基因簇产物的生物信息学分析与相互作用验证 | 第49-93页 |
| 3.1 mts基因簇的生物信息学分析 | 第49-52页 |
| 3.1.1 相关基因的生物信息学分析预测软件 | 第49-50页 |
| 3.1.2 各基因结构域及信号肽预测 | 第50-52页 |
| 3.2 mts基因簇的共转录分析 | 第52-72页 |
| 3.2.1 mts基因簇的共转录分析 | 第52-58页 |
| 3.2.1.1 实验材料 | 第52-53页 |
| 3.2.1.2 实验方法 | 第53-58页 |
| 3.2.1.3 实验结果 | 第58页 |
| 3.2.2 启动子预测 | 第58-60页 |
| 3.2.3 qPCR分析mts基因簇各基因的表达量 | 第60-72页 |
| 3.2.3.1 实验材料 | 第60-61页 |
| 3.2.3.2 实验方法 | 第61-63页 |
| 3.2.3.3 实验结果 | 第63-72页 |
| 3.3 酵母双杂交检测Mts不同组分之间可能的相互作用 | 第72-90页 |
| 3.3.1 实验材料 | 第73-78页 |
| 1. 菌株和质粒 | 第73-75页 |
| 2. 主要培养基和试剂 | 第75-77页 |
| 3. 仪器设备和耗材 | 第77-78页 |
| 3.3.2 实验方法 | 第78-83页 |
| 3.3.2.1 质粒的构建 | 第78-80页 |
| 3.3.2.2 酵母共转化菌株的获得 | 第80-81页 |
| 3.3.2.3 相互作用的验证 | 第81-83页 |
| 3.3.3 实验结果 | 第83-90页 |
| 3.3.3.1 片段自激活检测选择合适的3AT浓度 | 第83-84页 |
| 3.3.3.2 共转化菌株在缺陷型平板上的生长情况 | 第84-85页 |
| 3.3.3.3 X-α-GAL半乳糖苷酶活性检测验证相互作用的蛋白 | 第85-89页 |
| 3.3.3.4 酵母转化子β-半乳糖苷酶活性分析 | 第89-90页 |
| 3.4 本章小结 | 第90-93页 |
| 第四章 海水条件下mts上调S运动的机制 | 第93-121页 |
| 4.1 mts与epsA双敲及回补突变株的构建及性质分析 | 第93-103页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第93-96页 |
| 1. 菌株与质粒 | 第93-96页 |
| 2. 主要培养基及试剂 | 第96页 |
| 3. 仪器设备与耗材 | 第96页 |
| 4.1.2 实验方法 | 第96-101页 |
| 4.1.2.1 mts与epsA双敲除突变株的构建 | 第96-99页 |
| 4.1.2.2 回补突变株的构建 | 第99页 |
| 4.1.2.3 双敲及回补突变株的性质验证 | 第99-101页 |
| 4.1.3 实验结果 | 第101-103页 |
| 4.2 Western blot检测surface pili的量 | 第103-108页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第103-105页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第105-107页 |
| 4.2.2.1 Surface pili的提取 | 第105-106页 |
| 4.2.2.2 Western blot | 第106-107页 |
| 4.2.3 实验结果 | 第107-108页 |
| 4.3 甲基纤维素环境中菌株运动速率的分析 | 第108-110页 |
| 4.3.1 实验材料 | 第108页 |
| 4.3.2 实验方案 | 第108-109页 |
| 4.3.3 实验结果 | 第109-110页 |
| 4.4 MtsB的荧光标记 | 第110-114页 |
| 4.4.1 实验材料 | 第110页 |
| 4.4.2 实验方法 | 第110-113页 |
| 4.4.3 实验结果 | 第113-114页 |
| 4.5 酵母双杂交分析可能的相互作用 | 第114-119页 |
| 4.5.1 实验材料 | 第114页 |
| 4.5.2 实验方法 | 第114-115页 |
| 4.5.3 实验结果 | 第115-119页 |
| 4.5.3.1 共转化菌株在缺陷型平板上的生长情况 | 第115-116页 |
| 4.5.3.2 X-α-GAL半乳糖苷酶活性检测验证相互作用的蛋白 | 第116-119页 |
| 4.5.3.3 酵母转化子β-半乳糖苷酶活性分析 | 第119页 |
| 4.6 本章小结 | 第119-121页 |
| 第五章 海水条件下mts上调EPS产生的机制分析 | 第121-129页 |
| 5.1 mts与difA双敲除及回补突变株的获得 | 第121页 |
| 5.2 mts与difA双敲除及回补突变株胞外EPS分析 | 第121-124页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第122-123页 |
| 5.2.1.1 菌株及质粒 | 第122页 |
| 5.2.1.2 主要培养基和试剂 | 第122页 |
| 5.2.1.3 仪器设备和耗材 | 第122-123页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第123页 |
| 5.2.2.1 各菌株的EPS产生能力分析 | 第123页 |
| 5.2.2.2 各菌株的S运动分析 | 第123页 |
| 5.2.3 实验结果 | 第123-124页 |
| 5.3 酵母双杂交分析蛋白相互作用 | 第124-127页 |
| 5.3.1 实验材料 | 第124页 |
| 5.3.2 实验方法 | 第124-125页 |
| 5.3.3 实验结果 | 第125-127页 |
| 5.3.3.1 共转化菌株在缺陷型平板上的生长情况 | 第125页 |
| 5.3.3.2 X-α-GAL半乳糖苷酶活性检测验证相互作用的蛋白 | 第125-127页 |
| 5.3.3.3 酵母转化子β-半乳糖苷酶活性分析 | 第127页 |
| 5.4 本章小结 | 第127-129页 |
| 总结与展望 | 第129-133页 |
| 附录 | 第133-139页 |
| 附录一 本文中用到的质粒图谱 | 第133-137页 |
| 附录二 本文涉及的常用实验步骤 | 第137-139页 |
| 参考文献 | 第139-145页 |
| 致谢 | 第145-146页 |
| 附件 | 第146页 |
