| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略语/符号说明 | 第12-14页 |
| 前言 | 第14-17页 |
| 研究现状、成果 | 第14-16页 |
| 研究目的、方法 | 第16-17页 |
| 一、Vimentin的siRNA序列设计、筛选及大鼠皮质星形胶质细胞转染 | 第17-37页 |
| 1.1 对象和方法 | 第17-30页 |
| 1.1.1 实验材料与器械 | 第17-20页 |
| 1.1.1.1 实验动物 | 第17页 |
| 1.1.1.2 主要实验试剂 | 第17-18页 |
| 1.1.1.3 主要实验仪器 | 第18-19页 |
| 1.1.1.4 主要溶液的配制 | 第19-20页 |
| 1.1.2 Vimentin干扰si RNA质粒的设计和合成 | 第20-22页 |
| 1.1.2.1 Vimentin干扰siRNA质粒的设计 | 第20-21页 |
| 1.1.2.2 pGCsi-U6/Neo/GFP/EPAS1-siRNA重组质粒载体的构建 | 第21-22页 |
| 1.1.3 皮质星形胶质细胞分离、培养、纯化与鉴定 | 第22-24页 |
| 1.1.3.1 原代SD大鼠皮质星形胶质细胞分离、培养 | 第22-23页 |
| 1.1.3.2 星形胶质细胞的纯化 | 第23页 |
| 1.1.3.3 星形胶质细胞的传代培养 | 第23页 |
| 1.1.3.4 星形胶质细胞的免疫细胞化学鉴定 | 第23-24页 |
| 1.1.4 使用Lipofectamine? 2000转染大鼠星形胶质细胞 | 第24-25页 |
| 1.1.5 Western-Blot筛选鉴定siRNA- Vimentin有效序列 | 第25-27页 |
| 1.1.5.1 筛靶实验设置分组 | 第25页 |
| 1.1.5.2 蛋白提取 | 第25页 |
| 1.1.5.3 SDS-PAGE电泳 | 第25-26页 |
| 1.1.5.4 免疫印迹操作-转膜 | 第26页 |
| 1.1.5.5 免疫检测 | 第26-27页 |
| 1.1.5.6 化学发光 | 第27页 |
| 1.1.6 RT-PCR检测转染细胞中Vimentin的mRNA表达水平 | 第27-29页 |
| 1.1.6.1 总RNA的提取 | 第27页 |
| 1.1.6.2 总RNA浓度、纯度的测定 | 第27-28页 |
| 1.1.6.3 逆转录（RT）反应合成cDNA | 第28页 |
| 1.1.6.4 PCR反应 | 第28-29页 |
| 1.1.6.5 实验结果分析 | 第29页 |
| 1.1.7 统计分析 | 第29-30页 |
| 1.2 结果 | 第30-32页 |
| 1.2.1 大鼠星形胶质细胞培养及鉴定结果 | 第30页 |
| 1.2.2 星形胶质细胞免疫化学鉴定 | 第30页 |
| 1.2.3 星形胶质细胞转染效率检测 | 第30-31页 |
| 1.2.4 Western Blot检测筛靶实验结果 | 第31页 |
| 1.2.5 RT-PCR检测结果 | 第31-32页 |
| 1.2.5.1 各实验组样本实时定量PCR扩增曲线和溶解曲线 | 第31页 |
| 1.2.5.2 各组细胞中Vimentin的mRNA相对表达量的变化 | 第31-32页 |
| 1.3 讨论 | 第32-35页 |
| 1.4 小结 | 第35-37页 |
| 二、siRNA作用于Vimentin对大鼠星形胶质细胞及反应性星形胶质细胞增生的影响 | 第37-48页 |
| 2.1 对象和方法 | 第37-41页 |
| 2.1.1 实验材料与器械 | 第37-39页 |
| 2.1.1.1 实验主要试剂 | 第37页 |
| 2.1.1.2 实验主要仪器和器械 | 第37-38页 |
| 2.1.1.3 实验用液体配制 | 第38-39页 |
| 2.1.2 星形胶质细胞分离、培养、传代、鉴定及分组处理 | 第39页 |
| 2.1.2.1 星形胶质细胞分离、培养、传代及鉴定 | 第39页 |
| 2.1.2.2 细胞分组实验 | 第39页 |
| 2.1.3 星形胶质细胞划痕实验 | 第39-40页 |
| 2.1.3.1 实验步骤 | 第39-40页 |
| 2.1.3.2 结果分析 | 第40页 |
| 2.1.4 MTT法测定细胞生长曲线 | 第40页 |
| 2.1.5 免疫荧光染色： GFAP、CSPG、Vim免疫荧光染色 | 第40-41页 |
| 2.1.5.1 制片步骤 | 第40-41页 |
| 2.1.5.2 激光共聚焦扫描显微镜使用流程 | 第41页 |
| 2.1.6 Western Blot检测GFAP、CSPG和Vimentin蛋白表达 | 第41页 |
| 2.2 结果 | 第41-44页 |
| 2.2.1 星形胶质细胞划痕实验结果 | 第41-42页 |
| 2.2.2 MTT法检测细胞生长水平 | 第42页 |
| 2.2.3 GFAP、CSPG、Vim细胞免疫荧光染色结果 | 第42-43页 |
| 2.2.4 Western Blot检测GFAP、CSPG和Vimentin蛋白表达 | 第43-44页 |
| 2.3 讨论 | 第44-47页 |
| 2.4 小结 | 第47-48页 |
| 三、siRNA作用于Vimentin抑制大鼠脊髓损伤胶质瘢痕形成的研究 | 第48-60页 |
| 3.1 对象和方法 | 第48-53页 |
| 3.1.1 实验试剂及器械 | 第48页 |
| 3.1.1.1 实验动物 | 第48页 |
| 3.1.1.2 实验主要仪器和器械 | 第48页 |
| 3.1.2 SD大鼠脊髓损伤模型制备及实验分组 | 第48-49页 |
| 3.1.2.1 建立大鼠SCI模型 | 第48页 |
| 3.1.2.2 术后处理 | 第48-49页 |
| 3.1.2.3 给药方法 | 第49页 |
| 3.1.2.4 实验大鼠分组方法 | 第49页 |
| 3.1.3 脊髓冰冻切片的制备及胶质瘢痕体积测定 | 第49-50页 |
| 3.1.3.1 大鼠脊髓组织取材 | 第49页 |
| 3.1.3.2 冰冻切片的快速染步骤 | 第49-50页 |
| 3.1.3.3 胶质瘢痕体积的测定 | 第50页 |
| 3.1.4 RT-PCR检测脊髓组织GFAP、CSPG和Vimentin表达 | 第50-52页 |
| 3.1.4.1 引物资料 | 第50-51页 |
| 3.1.4.2 RNA提取 | 第51页 |
| 3.1.4.3 基因组DNA的去除 | 第51页 |
| 3.1.4.4 反转录 | 第51-52页 |
| 3.1.4.5 Realtime PCR | 第52页 |
| 3.1.4.6 Realtime PCR扩增程序 | 第52页 |
| 3.1.5 大鼠后肢运动功能评价 | 第52-53页 |
| 3.1.6 神经电生理测定 | 第53页 |
| 3.1.7 统计学处理 | 第53页 |
| 3.2 结果 | 第53-55页 |
| 3.2.1 大鼠脊髓损伤造模结果 | 第53页 |
| 3.2.2 胶质瘢痕体积测定结果 | 第53-54页 |
| 3.2.3 Real time PCR检测GFAP、CSPG和Vimentin表达 | 第54页 |
| 3.2.4 大鼠后肢运动功能BBB评分结果 | 第54页 |
| 3.2.5 电生理测定 | 第54-55页 |
| 3.3 讨论 | 第55-59页 |
| 3.4 小结 | 第59-60页 |
| 全文结论 | 第60-61页 |
| 论文创新点 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-74页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第74-75页 |
| 附录 | 第75-84页 |
| 综述 脊髓损伤胶质瘢痕形成及星形胶质细胞研究进展 | 第84-96页 |
| 参考文献 | 第90-96页 |
| 致谢 | 第96页 |
