| 摘要 | 第2-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 引言 | 第14-17页 |
| 第一部分 富集与扩增携有鼠白细胞介素-10 基因的重组腺病毒载体 | 第17-35页 |
| 实验材料 | 第17-18页 |
| 1 主要仪器 | 第17页 |
| 2 主要耗材及试剂 | 第17-18页 |
| 实验方法 | 第18-26页 |
| 1 重组腺病毒包装的细胞准备 | 第18-20页 |
| 1.1 HEK293细胞计数 | 第18-19页 |
| 1.2 HEK293细胞活性计数 | 第19页 |
| 1.3 HEK293细胞的冻存 | 第19页 |
| 1.4 HEK293细胞的复苏 | 第19页 |
| 1.5 HEK293细胞的传代 | 第19-20页 |
| 2 重组腺病毒的包装 | 第20-22页 |
| 3 重组腺病毒的扩增、富集与滴度测定 | 第22-26页 |
| 3.1 Ad-IL-10 的富集 | 第22-23页 |
| 3.2 Ad-IL-10 的扩增 | 第23页 |
| 3.3 Ad-IL-10 的滴度测定（TCID50法） | 第23-26页 |
| 结果 | 第26-27页 |
| 1 重组腺病毒的富集 | 第26-27页 |
| 2 重组腺病毒的扩增和滴度测定 | 第27页 |
| 讨论 | 第27-30页 |
| 结论 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-35页 |
| 第二部分 腺病毒介导的IL-10基因与抗CD20单克隆抗体联合干预对发病早期非肥胖性糖尿病鼠（NOD）鼠胰岛 β 细胞的保护作用及机制研究 | 第35-80页 |
| 实验材料 | 第35-40页 |
| 1 主要仪器 | 第35-36页 |
| 1.1 HE染色相关仪器 | 第35页 |
| 1.2 TUNEL染色相关仪器 | 第35页 |
| 1.3 免疫组化相关仪器 | 第35页 |
| 1.4 qRT-PCR相关仪器 | 第35-36页 |
| 1.5 Western Blot相关仪器 | 第36页 |
| 2 主要试剂和耗材 | 第36-39页 |
| 2.1 HE染色相关试剂和耗材 | 第36-37页 |
| 2.2 TUNEL染色相关试剂和耗材 | 第37页 |
| 2.3 免疫组化相关试剂和耗材 | 第37-38页 |
| 2.4 qRT-PCR相关试剂和耗材 | 第38页 |
| 2.5 Western Blot相关试剂和耗材 | 第38-39页 |
| 3 实验动物 | 第39-40页 |
| 实验方法 | 第40-54页 |
| 1 实验动物分组、处理及标本采集 | 第40页 |
| 1.1 动物分组 | 第40页 |
| 1.2 动物处理及标本采集 | 第40页 |
| 2 体重、血糖及基本生命体征的监测 | 第40-41页 |
| 3 HE染色评价胰岛炎症情况 | 第41页 |
| 4 TUNEL染色观察胰岛 β 细胞凋亡情况 | 第41-42页 |
| 5 免疫组化法测CD20、IL-10 表达情况 | 第42-43页 |
| 6 ELISA法测血清相关指标 | 第43-47页 |
| 6.1 血清C-肽测定 | 第43-44页 |
| 6.2 血清TNF-α 测定 | 第44-45页 |
| 6.3 血清IFN-γ 测定 | 第45页 |
| 6.4 血清IL-10 测定 | 第45-46页 |
| 6.5 血清IL-4 测定 | 第46页 |
| 6.6 胰腺胰岛素测定 | 第46-47页 |
| 7 qRT-PCR测凋亡相关基因的表达情况 | 第47-50页 |
| 7.1 RNA的提取 | 第47页 |
| 7.2 RNA浓度和纯度的测定 | 第47页 |
| 7.3 引物设计 | 第47-48页 |
| 7.4 cDNA第一链合成 | 第48-49页 |
| 7.5 qRT-PCR预实验 | 第49页 |
| 7.6 qRT-PCR实验 | 第49-50页 |
| 8 Western Blot法检测凋亡相关蛋白的表达情况 | 第50-54页 |
| 8.1 蛋白制备 | 第50页 |
| 8.2 蛋白定量 | 第50-51页 |
| 8.3 SDS-PAGE电泳 | 第51-53页 |
| 8.4 免疫印迹 | 第53-54页 |
| 8.5 图像分析 | 第54页 |
| 9 统计学方法分析 | 第54页 |
| 结果 | 第54-72页 |
| 1 体重、血糖及基本生命体征的监测 | 第54-56页 |
| 1.1 小鼠的一般情况 | 第54页 |
| 1.2 各组NOD鼠体质量比较 | 第54-55页 |
| 1.3 各组NOD鼠血糖比较 | 第55-56页 |
| 2 HE染色评价胰岛炎症情况 | 第56-58页 |
| 3 TUNEL染色观察胰岛 β 细胞凋亡 | 第58-59页 |
| 4 免疫组化 | 第59-61页 |
| 4.1 胰腺局部IL-10 表达情况 | 第59-60页 |
| 4.2 胰腺局部CD20表达情况 | 第60-61页 |
| 5 ELISA法测血清相关指标 | 第61-62页 |
| 5.1 血清IL-10、C-肽、胰腺胰岛素分泌情况 | 第61页 |
| 5.2 血清TNF-α、IFN-γ、IL-4 分泌情况 | 第61-62页 |
| 6 qRT-PCR测凋亡相关基因的表达情况 | 第62-66页 |
| 6.1 胰腺局部IL-10 mRNA表达情况 | 第62页 |
| 6.2 胰腺局部CD20 mRNA表达情况 | 第62-63页 |
| 6.3 胰腺局部insulin mRNA表达情况 | 第63-64页 |
| 6.4 胰腺局部Bcl-2、Bax mRNA表达情况 | 第64-66页 |
| 7 Western Blot法测凋亡相关蛋白的表达情况 | 第66-72页 |
| 7.1 胰腺局部pro-caspase3、cleaved-caspase-3、cleaved -caspase-8、cleaved-caspase-9 蛋白表达情况 | 第66-69页 |
| 7.2 胰腺局部Bcl-2、Bax蛋白表达情况 | 第69-72页 |
| 讨论 | 第72-76页 |
| 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-80页 |
| 综述 1型糖尿病胰岛 β 细胞保护策略研究进展 | 第80-137页 |
| 一、T1D发病机制的研究进展 | 第80-91页 |
| 1. B细胞与T1D | 第80-81页 |
| 2. T细胞与T1D | 第81-89页 |
| 3. NK细胞与T1D | 第89页 |
| 4. 单核-巨噬细胞与T1D | 第89-90页 |
| 5. DC细胞与T1D | 第90-91页 |
| 二、与胰岛 β 细胞凋亡相关的信号转导通路 | 第91-98页 |
| 1. MAPK信号转导通路 | 第91-92页 |
| 2. JNK通路 | 第92页 |
| 3. P38通路 | 第92-93页 |
| 4. NF-κB通路 | 第93-94页 |
| 5. mTORC1-S6K1信号通路 | 第94-95页 |
| 6. HIF-1α-Bcl-xL通路 | 第95页 |
| 7. Wnt信号通路 | 第95-96页 |
| 8. PI3K-Akt/PKB信号通路 | 第96-98页 |
| 三、T1D的免疫治疗新方法 | 第98-105页 |
| 1. 单克隆抗体 | 第98-100页 |
| 2. 抗原特异性疫苗 | 第100-102页 |
| 3. 细胞因子 | 第102-103页 |
| 4. 免疫抑制剂 | 第103-104页 |
| 5. 酶抑制剂 | 第104页 |
| 6. 多种治疗策略的联合应用 | 第104-105页 |
| 四、胰岛 β 细胞的转化与再生 | 第105-111页 |
| 1.1 将胰岛 α 细胞转化为 β 细胞 | 第106页 |
| 1.2 将肝细胞转化为胰岛 β 细胞 | 第106-108页 |
| 1.3 将胰岛 δ 细胞转化为 β 细胞 | 第108-111页 |
| 五、胰岛移植与干细胞移植 | 第111-113页 |
| 综述参考文献 | 第113-137页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第137-138页 |
| 附录 | 第138-141页 |
| 致谢 | 第141-142页 |
