| 摘要 | 第9-14页 |
| ABSTRACT | 第14-20页 |
| 第1章 文献综述 | 第21-35页 |
| 1.1 家蚕生长史 | 第21页 |
| 1.2 家蚕丝腺的结构组成及生理功能 | 第21-23页 |
| 1.3 家蚕丝素蛋白的组成 | 第23-24页 |
| 1.3.1 fibH基因 | 第23页 |
| 1.3.2 fibL基因 | 第23-24页 |
| 1.3.3 p25基因 | 第24页 |
| 1.4 家蚕丝素蛋白基因的转录调控 | 第24-26页 |
| 1.4.1 家蚕fibH基因的调控研究 | 第24-25页 |
| 1.4.2 家蚕fibL的转录调控研究 | 第25-26页 |
| 1.4.3 P25基因的转录调控研究 | 第26页 |
| 1.5 家蚕基因组精细图 | 第26-27页 |
| 1.6 MBF2的发现及研究进展 | 第27-28页 |
| 1.7 昆虫蜕皮激素及其信号转导途径 | 第28-31页 |
| 1.7.1 昆虫蜕皮激素 | 第28页 |
| 1.7.2 昆虫蜕皮激素信号转导途径 | 第28-30页 |
| 1.7.3 家蚕发育过程中体内激素的滴度变化 | 第30-31页 |
| 1.8 蜕皮激素对丝蛋白合成的影响 | 第31-32页 |
| 1.9 真核生物转录调控的研究方法 | 第32-35页 |
| 第2章 引言 | 第35-39页 |
| 2.1 研究背景及意义 | 第35-36页 |
| 2.2 拟解决的问题和研究内容 | 第36-37页 |
| 2.2.1 拟解决的问题 | 第36页 |
| 2.2.2 主要的研究内容 | 第36-37页 |
| 2.3 研究思路与技术路线 | 第37-39页 |
| 2.3.1 研究思路 | 第37页 |
| 2.3.2 技术路线 | 第37-39页 |
| 第3章 MBF2家族基因的鉴定、表达分析及功能研究 | 第39-55页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第39-41页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第39页 |
| 3.1.2 主要仪器及药品 | 第39-40页 |
| 3.1.3 引物 | 第40页 |
| 3.1.4 主要溶剂及配制 | 第40-41页 |
| 3.2 方法与步骤 | 第41-45页 |
| 3.2.1 家蚕MBF2家族基因的鉴定 | 第41页 |
| 3.2.2 家蚕MBF2家族基因的信息分析 | 第41-42页 |
| 3.2.3 家蚕的攻毒处理 | 第42页 |
| 3.2.4 家蚕的饥饿处理 | 第42页 |
| 3.2.5 RNA提取 | 第42-43页 |
| 3.2.6 cDNA的制备及检测 | 第43-44页 |
| 3.2.7 引物设计 | 第44页 |
| 3.2.8 荧光定量PCR | 第44-45页 |
| 3.3 结果与分析 | 第45-52页 |
| 3.3.1 MBF2家族基因的鉴定 | 第45页 |
| 3.3.2 家蚕MBF2家族基因系统进化分析 | 第45-48页 |
| 3.3.3 家蚕MBF2家族基因组织及时期表达谱分析 | 第48页 |
| 3.3.4 家蚕MBF2家族基因对Bb的响应 | 第48-51页 |
| 3.3.5 家族MBF2家族基因对饥饿的响应 | 第51-52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-55页 |
| 第4章 MBF2-1 的原核表达及表达模式分析 | 第55-83页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第55-61页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第55页 |
| 4.1.2 表达载体与表达菌株 | 第55页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第55-56页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第56页 |
| 4.1.5 主要溶剂配制 | 第56-61页 |
| 4.2 实验方法 | 第61-71页 |
| 4.2.1 RNA提取及cDNA的制备检测 | 第61页 |
| 4.2.2 荧光定量PCR | 第61页 |
| 4.2.3 目的基因的获得 | 第61-62页 |
| 4.2.4 PCR产物回收 | 第62页 |
| 4.2.5 双酶切 | 第62-63页 |
| 4.2.6 连接 | 第63页 |
| 4.2.7 转化 | 第63-64页 |
| 4.2.8 阳性克隆的筛选与测序验证 | 第64页 |
| 4.2.9 原核表达菌株的获得及诱导 | 第64-65页 |
| 4.2.10 SDS-PAGE电泳进行原核表达检测 | 第65页 |
| 4.2.11 目的蛋白的纯化 | 第65-68页 |
| 4.2.12 抗体制备 | 第68页 |
| 4.2.13 组织样品的蛋白提取 | 第68页 |
| 4.2.14 Western blot | 第68-70页 |
| 4.2.15 免疫荧光 | 第70-71页 |
| 4.3 结果与分析 | 第71-79页 |
| 4.3.1 MBF2原核表达载体构建 | 第71-72页 |
| 4.3.2 MBF2原核表达检测 | 第72页 |
| 4.3.3 目的蛋白的纯化 | 第72-73页 |
| 4.3.4 抗体制备及效价检测 | 第73-74页 |
| 4.3.5 MBF2五龄三天各组织的表达检测 | 第74-75页 |
| 4.3.6 MBF2丝腺中表达检测 | 第75-77页 |
| 4.3.7 MBF2在不同时期的后部丝腺的中的表达检测 | 第77-78页 |
| 4.3.8 MBF2在茧层中的分布 | 第78-79页 |
| 4.4 讨论 | 第79-83页 |
| 第5章 MBF2基因参与fibH的转录调控 | 第83-101页 |
| 5.1 材料与试剂 | 第83-87页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第83-84页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第84-85页 |
| 5.1.3 主要试剂及配制 | 第85-86页 |
| 5.1.4 引物 | 第86-87页 |
| 5.2 方法 | 第87-94页 |
| 5.2.1 BiFC载体构建 | 第87-89页 |
| 5.2.2 细胞过表达载体的构建 | 第89-90页 |
| 5.2.3 fibH启动子载体构建 | 第90页 |
| 5.2.4 Far-western | 第90页 |
| 5.2.5 细胞瞬时转染质粒的提取 | 第90-91页 |
| 5.2.6 细胞瞬时转染 | 第91-92页 |
| 5.2.7 双萤光素酶酶活测定 | 第92页 |
| 5.2.8 BiFC | 第92页 |
| 5.2.9 细胞总RNA提取及cDNA的制备 | 第92-93页 |
| 5.2.10 Western blot | 第93页 |
| 5.2.11 亚细胞定位 | 第93页 |
| 5.2.12 qPCR | 第93页 |
| 5.2.13 感受态细胞的制备 | 第93-94页 |
| 5.3 结果与分析 | 第94-98页 |
| 5.3.1 MBF2对fibH基因的调控 | 第94-95页 |
| 5.3.2 MBF2及Bmdimm的亚细胞共定位 | 第95-96页 |
| 5.3.3 MBF2与Bmdimm相互作用关系检测 | 第96-97页 |
| 5.3.4 MBF2与Bmdimm对fibH启动子活性的影响 | 第97-98页 |
| 5.4 讨论 | 第98-101页 |
| 第6章 MBF2可以与FTZ-F1作用参与fibH转录调控 | 第101-133页 |
| 6.1 材料与试剂 | 第101-105页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第101-102页 |
| 6.1.2 主要仪器 | 第102页 |
| 6.1.3 主要试剂及配制 | 第102-103页 |
| 6.1.4 引物 | 第103-104页 |
| 6.1.5 探针序列 | 第104页 |
| 6.1.6 主要试剂配制 | 第104-105页 |
| 6.2 方法 | 第105-113页 |
| 6.2.1 FTZ-F1蛋白的原核表达及纯化 | 第105页 |
| 6.2.2 核蛋白的提取 | 第105-106页 |
| 6.2.3 免疫共沉淀 | 第106-107页 |
| 6.2.4 qPCR | 第107页 |
| 6.2.5 ChIP | 第107-110页 |
| 6.2.6 EMSA | 第110-112页 |
| 6.2.7 Far-western | 第112页 |
| 6.2.8 Western blot | 第112-113页 |
| 6.2.9 萤光素酶酶活的测定 | 第113页 |
| 6.2.10 定点突变 | 第113页 |
| 6.2.11 细胞培养及转染 | 第113页 |
| 6.2.12 亚细胞定位 | 第113页 |
| 6.3 结果与分析 | 第113-130页 |
| 6.3.1 FTZ-F1原核表达载体的构建 | 第113-114页 |
| 6.3.2 FTZ-F1原核表达纯化及多克隆抗体的制备 | 第114-117页 |
| 6.3.4 FTZ-F1与MBF2相互作用 | 第117-120页 |
| 6.3.5 MBF2与FTZ-F1对fibH基因的调控 | 第120-121页 |
| 6.3.6 fibH基因启动子的调控元件的分析 | 第121-122页 |
| 6.3.7 fibH启动子上游Potential FTZ-F1元件的EMSA分析 | 第122-123页 |
| 6.3.8 染色质免疫共沉淀 | 第123-124页 |
| 6.3.9 FTZ-F1对fibH启动子活性的影响 | 第124页 |
| 6.3.10 fibH启动子FTZ-F1结合元件突变及缺失分析 | 第124-125页 |
| 6.3.11 ftz-f1在五龄三天各组织的qPCR及Western blot检测 | 第125-126页 |
| 6.3.12 FTZ-F1在不同时期的后部丝腺中的qPCR及Western blot表达分析 | 第126-127页 |
| 6.3.13 FTZ-F1与Bmdimm亚细胞定位 | 第127-128页 |
| 6.3.14 FTZ-F1与Bmdimm相互作用 | 第128-129页 |
| 6.3.15 FTZ-F1及Bmdimm对fibH启动子活性的影响 | 第129-130页 |
| 6.4 讨论 | 第130-133页 |
| 第7章 蜕皮激素对fibH调控的影响 | 第133-139页 |
| 7.1 材料与试剂 | 第133-134页 |
| 7.1.1 实验材料 | 第133页 |
| 7.1.2 主要仪器 | 第133-134页 |
| 7.1.3 主要试剂及配制 | 第134页 |
| 7.2 方法 | 第134页 |
| 7.2.1 酶活测定 | 第134页 |
| 7.2.2 激素处理 | 第134页 |
| 7.2.3 qPCR | 第134页 |
| 7.3 结果与分析 | 第134-137页 |
| 7.3.1 蜕皮激素对fibH启动子活性的影响 | 第134-135页 |
| 7.3.2 MBF2启动子信息分析 | 第135页 |
| 7.3.3 20E诱导家蚕体内MBF2的上调表达 | 第135-137页 |
| 7.4 讨论 | 第137-139页 |
| 第8章 总结与结论 | 第139-145页 |
| 8.1 论文总结 | 第139-142页 |
| 8.1.1 MBF2家族部分论文研究结果 | 第139-140页 |
| 8.1.2 MBF2部分论文研究结果 | 第140页 |
| 8.1.3 FTZ-F1部分论文研究结果 | 第140-142页 |
| 8.2 工作中待解决的问题 | 第142页 |
| 8.2.1 关于MBF2家族研究待解决的问题 | 第142页 |
| 8.2.2 关于MBF2研究待解决的问题 | 第142页 |
| 8.2.3 关于FTZ-F1研究待解决的问题 | 第142页 |
| 8.3 前景与展望 | 第142-145页 |
| 论文创新点 | 第145-147页 |
| 参考文献 | 第147-153页 |
| 缩略词表 | 第153-157页 |
| 已发表及待发表的论文 | 第157-159页 |
| 致谢 | 第159-160页 |
