| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-16页 |
| 1.1 葡萄糖二酸概述 | 第8-11页 |
| 1.1.1 葡萄糖二酸简介 | 第8页 |
| 1.1.2 葡萄糖二酸的应用 | 第8-10页 |
| 1.1.3 葡萄糖二酸的生产方法 | 第10页 |
| 1.1.4 葡萄糖二酸的生物合成 | 第10-11页 |
| 1.2 Pichia pastoris表达系统 | 第11-14页 |
| 1.2.1 P. pastoris表达系统简介 | 第11-12页 |
| 1.2.2 P. pastoris启动子 | 第12页 |
| 1.2.3 P. pastoris载体与菌株 | 第12-13页 |
| 1.2.4 P. pastoris表达系统的应用 | 第13-14页 |
| 1.3 立题背景与意义 | 第14页 |
| 1.4 主要研究内容 | 第14-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-24页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-19页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第16-17页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第17页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第17-19页 |
| 2.1.4 培养基 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-24页 |
| 2.2.1 多序列比对分析 | 第19页 |
| 2.2.2 分子生物学操作 | 第19-20页 |
| 2.2.3 重组菌的构建 | 第20-21页 |
| 2.2.4 培养方法 | 第21-22页 |
| 2.2.5 测定及分析方法 | 第22-24页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第24-38页 |
| 3.1 P. pastoris内源肌醇加氧酶（ppMIOX）的功能验证 | 第24-26页 |
| 3.1.1 ppMIOX编码基因的氨基酸序列分析 | 第24-25页 |
| 3.1.2 重组菌P. pastoris GS115-pM的构建及验证 | 第25页 |
| 3.1.3 ppMIOX的催化功能分析 | 第25-26页 |
| 3.2 葡萄糖二酸合成途径的构建 | 第26-30页 |
| 3.2.1 葡萄糖二酸生产菌株的构建 | 第26-27页 |
| 3.2.2 不同重组菌株葡萄糖二酸产量的分析 | 第27-29页 |
| 3.2.3 途径酶的活性分析 | 第29-30页 |
| 3.3 融合表达提高葡萄糖二酸产量 | 第30-33页 |
| 3.3.1 途径酶的融合表达设计及菌株构建 | 第30-31页 |
| 3.3.2 融合表达对葡萄糖二酸产量的影响 | 第31-32页 |
| 3.3.3 融合表达对途径酶活性的影响 | 第32-33页 |
| 3.4 重组高产菌的摇瓶发酵优化及分批补料培养 | 第33-38页 |
| 3.4.1 摇瓶发酵优化 | 第33-36页 |
| 3.4.2 重组高产菌分批补料发酵 | 第36-38页 |
| 主要结论与展望 | 第38-40页 |
| 主要结论 | 第38-39页 |
| 展望 | 第39-40页 |
| 致谢 | 第40-42页 |
| 参考文献 | 第42-46页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第46页 |