| 摘要 | 第3-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 前言 | 第14-21页 |
| 第一章 肿瘤干细胞的筛选及鉴定 | 第21-42页 |
| 1.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 1.1.1 实验细胞 | 第21页 |
| 1.1.2 主要实验试剂 | 第21-22页 |
| 1.1.3 主要实验器材 | 第22-23页 |
| 1.1.4 主要试剂的配置 | 第23-24页 |
| 1.2 实验方法 | 第24-31页 |
| 1.2.1 肿瘤细胞培养 | 第24页 |
| 1.2.2 细胞消化传代 | 第24页 |
| 1.2.3 有限稀释法 | 第24页 |
| 1.2.4 无血清培养传代 | 第24-25页 |
| 1.2.5 流式细胞术(FCM) | 第25-26页 |
| 1.2.6 实时定量基因扩增荧光检测系统(qPCR) | 第26-28页 |
| 1.2.7 检测肿瘤干细胞的分化能力 | 第28页 |
| 1.2.8 检测体外细胞增殖能力 | 第28页 |
| 1.2.9 体外细胞对抗肿瘤药物紫杉醇的耐受能力 | 第28-29页 |
| 1.2.10 EdU掺入实验 | 第29-30页 |
| 1.2.11 细胞周期检测 | 第30页 |
| 1.2.12. 体内细胞成瘤实验 | 第30-31页 |
| 1.2.13 统计学分析 | 第31页 |
| 1.3 实验结果 | 第31-39页 |
| 1.3.1 肿瘤干细胞成球生长 | 第31-32页 |
| 1.3.2 流式细胞术 | 第32-33页 |
| 1.3.3 实时定量基因扩增荧光检测系统(qPCR) | 第33-34页 |
| 1.3.4 检测肿瘤干细胞的分化能力 | 第34-35页 |
| 1.3.5 体外细胞增殖能力 | 第35页 |
| 1.3.6 体外细胞对抗肿瘤药物紫杉醇的耐受能力 | 第35-36页 |
| 1.3.7 EdU掺入实验 | 第36-37页 |
| 1.3.8 细胞周期检测 | 第37-38页 |
| 1.3.9 体内细胞成瘤实验 | 第38-39页 |
| 1.4 讨论 | 第39-41页 |
| 1.5 研究结论 | 第41-42页 |
| 第二章 检测Cdc6在肿瘤干细胞中的表达水平及功能 | 第42-62页 |
| 2.1 实验材料 | 第42-47页 |
| 2.1.1 实验细胞 | 第42页 |
| 2.1.2 主要实验试剂 | 第42-43页 |
| 2.1.3 主要实验器材 | 第43-44页 |
| 2.1.4 主要试剂配置 | 第44-47页 |
| 2.2 实验方法 | 第47-52页 |
| 2.2.1 细胞总蛋白的提取 | 第47页 |
| 2.2.2 染色质蛋白分离 | 第47-48页 |
| 2.2.3 Western Bloting检测目的蛋白的表达水平 | 第48-49页 |
| 2.2.4 ChIP沉淀染色质蛋白结合的染色质片段 | 第49-51页 |
| 2.2.5 琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物 | 第51页 |
| 2.2.6 细胞增殖实验 | 第51-52页 |
| 2.2.7 流式细胞仪检测凋亡 | 第52页 |
| 2.2.8 统计学分析 | 第52页 |
| 2.3 实验结果 | 第52-59页 |
| 2.3.1 检测肿瘤干细胞中Cdc6总蛋白的表达 | 第52-53页 |
| 2.3.2 检测肿瘤干细胞中Cdc6在染色质和非染色质部分的表达 | 第53-55页 |
| 2.3.3 ChIP沉淀染色质蛋白结合的染色质片段RD~(INK4/ARF) | 第55-56页 |
| 2.3.4 MTS检测耐药性 | 第56-57页 |
| 2.3.5 检测NCTD对肿瘤干细胞分化的影响 | 第57-58页 |
| 2.3.6 细胞凋亡检测 | 第58-59页 |
| 2.4 讨论 | 第59-61页 |
| 2.5 研究结论 | 第61-62页 |
| 总结 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 攻读硕士期间成果 | 第70-71页 |
| 中英文缩略表 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
