| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 英文缩略词 | 第11-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-35页 |
| 1.1 动脉粥样硬化与凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 | 第19-25页 |
| 1.1.1 动脉粥样硬化 (AS) 简介 | 第19-20页 |
| 1.1.2 凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1 (LOX-1) | 第20-25页 |
| 1.1.2.1 LOX-1 蛋白简介 | 第20-21页 |
| 1.1.2.2 LOX-1 是AS的生物标志物 | 第21-23页 |
| 1.1.2.3 LOX-1 可以作为AS的治疗靶标 | 第23-25页 |
| 1.2 抗体工程 | 第25-30页 |
| 1.2.1 抗体工程概述 | 第25-26页 |
| 1.2.2 基因工程抗体 | 第26-28页 |
| 1.2.2.1 人源化单克隆抗体 | 第26页 |
| 1.2.2.2 重组抗体片段 | 第26-27页 |
| 1.2.2.3 抗体融合蛋白 | 第27-28页 |
| 1.2.3 单链抗体 (scFv) 的研究进展 | 第28-30页 |
| 1.2.3.1 scFv的简介 | 第28页 |
| 1.2.3.2 scFv的制备 | 第28-29页 |
| 1.2.3.3 scFv的进化 | 第29-30页 |
| 1.3 药物靶向传递的研究进展 | 第30-34页 |
| 1.3.1 药物靶向传递的简介 | 第30-31页 |
| 1.3.2 scFv在药物靶向传递中的应用 | 第31-32页 |
| 1.3.2.1 scFv对小分子干扰RNA (si RNA) 的靶向传递 | 第31页 |
| 1.3.2.2 scFv对小分子药物的靶向传递 | 第31-32页 |
| 1.3.2.3 scFv对纳米粒子的靶向传递 | 第32页 |
| 1.3.2.4 scFv对大分子的靶向传递 | 第32页 |
| 1.3.3 scFv在动脉粥样硬化治疗药物靶向传递中的应用前景 | 第32-34页 |
| 1.4 本文立题思想与研究意义 | 第34-35页 |
| 第二章 抗LOX-1 scFv制备工艺研究 | 第35-61页 |
| 2.1 引言 | 第35-36页 |
| 2.2 实验部分 | 第36-44页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第37-38页 |
| 2.2.3 实验步骤 | 第38-44页 |
| 2.2.3.1 表达质粒的构建 | 第38-39页 |
| 2.2.3.2 抗LOX-1 scFv在大肠杆菌中的表达 | 第39-40页 |
| 2.2.3.3 抗LOX-1 scFv在短小芽孢杆菌中的表达 | 第40-41页 |
| 2.2.3.4 抗LOX-1 scFv表达培养基的优化 | 第41-42页 |
| 2.2.3.5 抗LOX-1 scFv的纯化 | 第42页 |
| 2.2.3.6 Western blot分析 | 第42-43页 |
| 2.2.3.7 抗LOX-1 scFv抗原亲和力的测定 | 第43页 |
| 2.2.3.8 圆二色谱和荧光光谱分析 | 第43-44页 |
| 2.2.3.9 动态光散射 | 第44页 |
| 2.2.3.10 热稳定性分析 | 第44页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第44-59页 |
| 2.3.1 抗LOX-1 scFv表达质粒的构建 | 第44-45页 |
| 2.3.2 抗LOX-1 scFv的表达和纯化 | 第45-48页 |
| 2.3.3 抗LOX-1 scFv的表达优化 | 第48-53页 |
| 2.3.3.1 抗LOX-1 scFv在五种表达培养基中的表达 | 第48-49页 |
| 2.3.3.2 响应面法系统优化表达培养基 | 第49-53页 |
| 2.3.4 抗LOX-1 scFv在 5-L发酵罐中的发酵培养 | 第53-54页 |
| 2.3.5 抗LOX-1 scFv性质表征 | 第54-59页 |
| 2.3.5.1 抗LOX-1 scFv的抗原亲和活力测定 | 第54-56页 |
| 2.3.5.2 抗LOX-1 scFv的结构特征 | 第56-57页 |
| 2.3.5.3 抗LOX-1 scFv的稳定性测定 | 第57-59页 |
| 2.4 本章小结 | 第59-61页 |
| 第三章 抗LOX-1 scFv的多聚化研究 | 第61-81页 |
| 3.1 引言 | 第61-62页 |
| 3.2 实验部分 | 第62-66页 |
| 3.2.1 实验试剂 | 第62页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第62-63页 |
| 3.2.3 实验步骤 | 第63-66页 |
| 3.2.3.1 抗LOX-1 scFv多聚体的构建 | 第63-64页 |
| 3.2.3.2 scFv多聚体的表达和纯化 | 第64页 |
| 3.2.3.3 动态光散射和静态光散射 | 第64页 |
| 3.2.3.4 Western blot分析 | 第64-65页 |
| 3.2.3.5 非竞争ELISA | 第65页 |
| 3.2.3.6 抗原亲和力的测定 | 第65页 |
| 3.2.3.7 LOX-1 与ox LDL结合抑制活性的测定 | 第65页 |
| 3.2.3.8 圆二色谱和荧光光谱分析 | 第65-66页 |
| 3.2.3.9 血清稳定性的测定 | 第66页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第66-80页 |
| 3.3.1 抗LOX-1 scFv多聚体的构建和制备 | 第66-70页 |
| 3.3.2 抗LOX-1 scFv多聚体分子量鉴定 | 第70-72页 |
| 3.3.3 抗LOX-1 scFv多聚体性质表征 | 第72-80页 |
| 3.3.3.1 scFv多聚体的抗原结合能力测定 | 第72-74页 |
| 3.3.3.2 scFv多聚体结构特征和热稳定性 | 第74-77页 |
| 3.3.3.3 scFv多聚体的血清稳定性和中和活性测定 | 第77-80页 |
| 3.4 本章小结 | 第80-81页 |
| 第四章 抗LOX-1 scFv与LOX-1 结合多肽的融合 | 第81-99页 |
| 4.1 引言 | 第81-82页 |
| 4.2 实验部分 | 第82-86页 |
| 4.2.1 实验试剂 | 第82页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第82-83页 |
| 4.2.3 实验步骤 | 第83-86页 |
| 4.2.3.1 生物信息学研究 | 第83页 |
| 4.2.3.2 抗LOX-1 scFv和多肽融合蛋白的构建 | 第83-86页 |
| 4.2.3.3 抗LOX-1 scFv和多肽融合蛋白的表达纯化 | 第86页 |
| 4.2.3.4 非竞争ELISA | 第86页 |
| 4.2.3.5 抗原亲和力的测定 | 第86页 |
| 4.2.3.6 圆二色谱和荧光光谱分析 | 第86页 |
| 4.2.3.7 血清稳定性 | 第86页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第86-98页 |
| 4.3.1 抗LOX-1 scFv同源模拟 | 第86-87页 |
| 4.3.2 分子对接及对接复合物结合位点分析 | 第87-90页 |
| 4.3.3 抗LOX-1 scFv和多肽融合蛋白的构建和表达 | 第90-92页 |
| 4.3.4 抗LOX-1 scFv和多肽融合蛋白的性质表征 | 第92-98页 |
| 4.3.4.1 scFv和多肽融合蛋白抗原亲和力测定 | 第92-93页 |
| 4.3.4.2 scFv和多肽融合蛋白结构表征 | 第93-96页 |
| 4.3.4.3 scFv和多肽融合蛋白稳定性测定 | 第96-98页 |
| 4.4 本章小结 | 第98-99页 |
| 第五章 计算机辅助的抗LOX-1 scFv的体外突变进化 | 第99-117页 |
| 5.1 引言 | 第99-100页 |
| 5.2 实验部分 | 第100-105页 |
| 5.2.1 实验试剂 | 第100页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第100-101页 |
| 5.2.3 实验步骤 | 第101-105页 |
| 5.2.3.1 生物信息学研究 | 第101页 |
| 5.2.3.2 抗LOX-1 scFv突变体的构建 | 第101-105页 |
| 5.2.3.3 抗LOX-1 scFv突变体的表达和纯化 | 第105页 |
| 5.2.3.4 非竞争ELISA | 第105页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第105-116页 |
| 5.3.1 对接复合物结合关键氨基酸的分析 | 第105-109页 |
| 5.3.2 抗LOX-1 scFv突变分析 | 第109页 |
| 5.3.3 抗LOX-1 scFv突变体的制备和性质表征 | 第109-116页 |
| 5.3.3.1 抗LOX-1 scFv突变体的构建和表达 | 第109-110页 |
| 5.3.3.2 抗LOX-1 scFv突变体抗原亲和力的测定 | 第110-112页 |
| 5.3.3.3 抗LOX-1 scFv突变体结构分析 | 第112-113页 |
| 5.3.3.4 抗LOX-1 scFv组合突变分析 | 第113-114页 |
| 5.3.3.4 抗LOX-1 scFv突变体稳定性分析 | 第114-116页 |
| 5.4 本章小结 | 第116-117页 |
| 第六章 抗动脉粥样硬化双功能抗体的制备和表征 | 第117-131页 |
| 6.1 引言 | 第117-118页 |
| 6.2 实验部分 | 第118-122页 |
| 6.2.1 实验试剂 | 第118页 |
| 6.2.2 实验仪器 | 第118页 |
| 6.2.3 实验步骤 | 第118-122页 |
| 6.2.3.1 双功能抗体分子的构建 | 第118-120页 |
| 6.2.3.2 双功能抗体的制备 | 第120页 |
| 6.2.3.3 多肽的分离与纯化 | 第120-121页 |
| 6.2.3.4 抗原亲和力的测定 | 第121页 |
| 6.2.3.5 荧光光谱分析 | 第121页 |
| 6.2.3.6 体外测定ACE-1 抑制活性 | 第121页 |
| 6.2.3.7 DPPH自由基清除活性 | 第121-122页 |
| 6.2.3.8 体外测定凝血酶抑制活性 | 第122页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第122-130页 |
| 6.3.1 双功能抗体的分子设计 | 第122-123页 |
| 6.3.2 双功能抗体的表达纯化 | 第123-124页 |
| 6.3.3 双功能抗体的性质表征 | 第124-130页 |
| 6.3.3.1 抗原亲和活性的变化 | 第124-126页 |
| 6.3.3.3 ACE抑制活性分析 | 第126-128页 |
| 6.3.3.4 抗氧化活性分析 | 第128-129页 |
| 6.3.3.5 抗凝血活性分析 | 第129-130页 |
| 6.4 本章小结 | 第130-131页 |
| 第七章 总结与展望 | 第131-135页 |
| 7.1 总结 | 第131-133页 |
| 7.2 创新点 | 第133页 |
| 7.3 展望 | 第133-135页 |
| 参考文献 | 第135-153页 |
| 博士期间科研成果 | 第153-155页 |
| 致谢 | 第155页 |
