| 内容摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第13-21页 |
| 1.1 研究背景 | 第13-14页 |
| 1.1.1 多发性骨髓瘤 | 第13页 |
| 1.1.2 多发性骨髓瘤的免疫治疗 | 第13-14页 |
| 1.2 Chimeric antigen receptor T-cells immunotherapy (CAR-T细胞免疫疗法) | 第14-19页 |
| 1.2.1 CAR-T细胞免疫疗法 | 第14-16页 |
| 1.2.2 CART细胞疗法治疗白血病 | 第16页 |
| 1.2.3 CART细胞疗法治疗多发性骨髓瘤目前的进展 | 第16-18页 |
| 1.2.4 CD138,BCMA, CD38,CD40和CD19靶标分子的介绍 | 第18-19页 |
| 1.3 实验课题的目标与思路 | 第19-21页 |
| 第二章 构建各靶标的CAR分子慢病毒载体 | 第21-39页 |
| 2.1 实验材料、试剂和仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.1 实验材料与试剂 | 第21页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 实验内容 | 第22-28页 |
| 2.2.1 各靶标single-chain antibody fragment(scFv)序列的获取 | 第22页 |
| 2.2.2 各靶标scFv序列的扩增和鉴定 | 第22-23页 |
| 2.2.3 各靶标工具质粒的酶切 | 第23-24页 |
| 2.2.4 各靶标scFv片段和酶切后质粒的重组和鉴定 | 第24-27页 |
| 2.2.5 各靶标重组质粒的抽提和DNA测序 | 第27-28页 |
| 2.3 实验内容与讨论 | 第28-39页 |
| 2.3.1 各靶标scFv片段的鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3.2 各靶标工具质粒骨架的鉴定 | 第29-31页 |
| 2.3.3 各靶标scFv片段和骨架质粒重组的鉴定 | 第31-33页 |
| 2.3.4 各靶标重组质粒的DNA序列 | 第33-39页 |
| 第三章 包装各重组质粒的慢病毒及测定其病毒滴度 | 第39-47页 |
| 3.1 实验材料、试剂和仪器 | 第39-40页 |
| 3.1.1 实验材料与试剂 | 第39页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第39-40页 |
| 3.2 实验内容 | 第40-43页 |
| 3.2.1 包装各重组质粒的慢病毒 | 第40-41页 |
| 3.2.2 超速离心沉淀法浓缩与纯化各重组质粒的慢病毒 | 第41页 |
| 3.2.3 定量PCR法测定各重组质粒病毒的滴度 | 第41-43页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第43-47页 |
| 3.3.1 各重组质粒转染293T细胞24小时 | 第43-44页 |
| 3.3.2 各重组质粒的Lentivi rus感染293T 48小时 | 第44-46页 |
| 3.3.3 各靶标慢病毒的滴度值 | 第46-47页 |
| 第四章 "靶"细胞株的筛选和"效应"CART细胞的制备 | 第47-55页 |
| 4.1 实验材料、试剂和仪器 | 第47-48页 |
| 4.1.1 实验材料与试剂 | 第47-48页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第48页 |
| 4.2 实验内容 | 第48-53页 |
| 4.2.1 "靶"细胞株的筛选 | 第48-50页 |
| 4.2.2 "效应"CART细胞的制备 | 第50-53页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第53-55页 |
| 4.3.1 各靶标分子慢病毒感染K562细胞的效率 | 第53页 |
| 4.3.2 各靶标CAR分子转导T细胞的效率 | 第53-55页 |
| 第五章 CART细胞对多发性骨髓瘤特异性抗肿瘤效应的体外实验 | 第55-61页 |
| 5.1 实验材料、试剂和仪器 | 第55页 |
| 5.1.1 实验材料与试剂 | 第55页 |
| 5.1.2 实验仪器 | 第55页 |
| 5.2 实验内容 | 第55-59页 |
| 5.2.1 效应细胞和靶细胞的准备(以CD138-CART和CD138-K562细胞为例) | 第55-56页 |
| 5.2.2 LDH法验证各靶标体外杀伤效果 | 第56-58页 |
| 5.2.3 磁珠捕获法测试杀伤后的细胞因子 | 第58-59页 |
| 5.3 实验结果与讨论 | 第59-61页 |
| 5.3.1 各靶标的杀伤效果的比较 | 第59-60页 |
| 5.3.2 各靶标CART细胞杀伤后细胞因子的释放 | 第60-61页 |
| 第六章 结论与展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 在学期间所取得的科研成果 | 第69页 |
