| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 缩略词中英文对照表 | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-36页 |
| 1 非编码RNA研究进展 | 第16-28页 |
| 1.1 非编码RNA类型 | 第16页 |
| 1.2 IncRNA研究进展 | 第16-21页 |
| 1.3 miRNA的研究进展 | 第21-28页 |
| 2 昆虫变态发育 | 第28-34页 |
| 2.1 昆虫蜕皮激素的合成 | 第28-30页 |
| 2.2 蜕皮激素调控昆虫变态发育 | 第30-32页 |
| 2.3 miRNA参与昆虫变态发育 | 第32-33页 |
| 2.4 miR-14的研究进展 | 第33-34页 |
| 3 研究目的和意义 | 第34-36页 |
| 第二章 五种昆虫非编码RNA基因的发现 | 第36-54页 |
| 1 材料与方法 | 第37-41页 |
| 1.1 实验试虫的饲养 | 第37页 |
| 1.2 主要仪器设备与试剂 | 第37页 |
| 1.3 数据来源 | 第37-38页 |
| 1.4 计算机与软件系统 | 第38页 |
| 1.5 总RNA提取 | 第38-39页 |
| 1.6 小RNA测序及数据分析 | 第39-40页 |
| 1.7 IncRNA基因发现 | 第40-41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-51页 |
| 2.1 小RNA测序长度统计分析 | 第41-42页 |
| 2.2 测序所得5种昆虫小RNA注释 | 第42-43页 |
| 2.3 miRNA预测流程的构建 | 第43-44页 |
| 2.4 lncRNA预测流程的构建 | 第44-45页 |
| 2.5 lncRNA分子特征分析 | 第45-49页 |
| 2.6 lncRNA表达分析 | 第49-51页 |
| 3 讨论 | 第51-54页 |
| 第三章 昆虫miRNA基因家族分析 | 第54-62页 |
| 1 材料与方法 | 第54-56页 |
| 1.1 数据来源 | 第54-55页 |
| 1.2 计算机与软件系统 | 第55页 |
| 1.3 miRNA基因家族分析的物种选取 | 第55页 |
| 1.4 保守及特异性miRNA家族定义 | 第55-56页 |
| 1.5 昆虫特异性miRNA序列分析 | 第56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-60页 |
| 2.1 miRNA基因家族分析的物种分布 | 第56-57页 |
| 2.2 保守及特异性miRNA基因家族分析 | 第57-60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| 第四章 昆虫特异性miR-14的靶基因预测及验证 | 第62-78页 |
| 1 材料与方法 | 第63-70页 |
| 1.1 实验试虫的饲养 | 第63页 |
| 1.2 主要仪器设备与试剂耗材 | 第63-64页 |
| 1.3 数据来源 | 第64页 |
| 1.4 计算机与软件系统 | 第64页 |
| 1.5 构建昆虫蜕皮激素通路 | 第64-65页 |
| 1.6 12种昆虫miR-14靶基因预测 | 第65页 |
| 1.7 双荧光素酶报告基因载体构建 | 第65-69页 |
| 1.8 细胞转染 | 第69页 |
| 1.9 双荧光素酶报告基因检测 | 第69-70页 |
| 2 结果与分析 | 第70-76页 |
| 2.1 昆虫蜕皮激素通路的构建 | 第70页 |
| 2.2 12种昆虫miR-14靶基因预测结果分析 | 第70-71页 |
| 2.3 家蚕靶基因表达载体及突变载体构建 | 第71-74页 |
| 2.4 家蚕miR-14靶基因鉴定 | 第74-76页 |
| 3 讨论 | 第76-78页 |
| 第五章 miR-14及其靶基因的表达分析 | 第78-92页 |
| 1 材料与方法 | 第79-84页 |
| 1.1 实验试虫的饲养 | 第79页 |
| 1.2 主要仪器设备与试剂耗材 | 第79-80页 |
| 1.3 家蚕不同组织的解剖 | 第80页 |
| 1.4 总RNA提取 | 第80-81页 |
| 1.5 cDNA的合成 | 第81-82页 |
| 1.6 引物设计 | 第82-83页 |
| 1.7 实时荧光定量PCR反应 | 第83-84页 |
| 1.8 数据分析 | 第84页 |
| 2 结果与分析 | 第84-90页 |
| 2.1 miR-14基因在不同发育龄期的表达情况 | 第84-85页 |
| 2.2 miR-14在三龄至四龄中每6h的表达变化情况 | 第85-87页 |
| 2.3 miR-14在不同组织的表达变化 | 第87页 |
| 2.4 靶基因在幼虫期和蛹期的表达变化 | 第87-90页 |
| 3 讨论 | 第90-92页 |
| 第六章 过表达和干扰miR-14对家蚕蜕皮发育的影响 | 第92-106页 |
| 1 材料与方法 | 第93-97页 |
| 1.1 实验试虫的饲养 | 第93页 |
| 1.2 主要仪器设备与试剂耗材 | 第93页 |
| 1.3 dsRNA的合成 | 第93-95页 |
| 1.4 家蚕活体注射 | 第95-96页 |
| 1.5 总RNA提取 | 第96页 |
| 1.6 cDNA的合成 | 第96页 |
| 1.7 qRT-PCR引物设计 | 第96页 |
| 1.8 qRT-PCR检测过表达、干扰效率 | 第96页 |
| 1.9 家蚕表型观察 | 第96-97页 |
| 2 结果与分析 | 第97-104页 |
| 2.1 家蚕Dicer-1基因的干扰 | 第97-99页 |
| 2.2 过表达miR-14对家蚕蜕皮发育的影响 | 第99-103页 |
| 2.3 干扰miR-14对家蚕蜕皮发育的影响 | 第103-104页 |
| 3 讨论 | 第104-106页 |
| 全文总结 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-122页 |
| 附录 | 第122-132页 |
| 攻读博士学位期间学术论文发表情况 | 第132-134页 |
| 致谢 | 第134页 |