| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 板栗疫病 | 第11-12页 |
| 1.2 蛋白激发子 | 第12-16页 |
| 1.2.1 Harpin蛋白 | 第13-14页 |
| 1.2.2 激发素 | 第14-15页 |
| 1.2.3 激活蛋白 | 第15页 |
| 1.2.4 激发子诱导的防御反应 | 第15-16页 |
| 1.3 蛋白表达系统概述 | 第16-17页 |
| 1.3.1 原核表达系统 | 第16页 |
| 1.3.2 真核表达系统 | 第16页 |
| 1.3.3 无细胞表达系统 | 第16-17页 |
| 1.4 蛋白的可溶性表达 | 第17-18页 |
| 1.4.1 包涵体的形成 | 第17页 |
| 1.4.2 包涵体的特点 | 第17页 |
| 1.4.3 包涵体的变性与复性 | 第17-18页 |
| 1.5 提高可溶性蛋白含量的措施 | 第18页 |
| 1.5.1 优化诱导条件 | 第18页 |
| 1.5.2 采用自动诱导培养基 | 第18页 |
| 1.5.3 其他措施 | 第18页 |
| 1.6 蛋白结构与功能预测—生物信息学分析 | 第18-19页 |
| 1.7 研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 1.8 技术路线 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-32页 |
| 2.0 实验菌株与材料 | 第21页 |
| 2.1 实验试剂和仪器 | 第21页 |
| 2.2 培养基与试剂配方 | 第21-22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-32页 |
| 2.3.1 菌株培养与活化 | 第22页 |
| 2.3.2 栗疫菌DNA提取 | 第22-23页 |
| 2.3.3 PCR扩增目的片段 | 第23页 |
| 2.3.4 PCR产物与T载体的连接、转化与验证 | 第23-24页 |
| 2.3.5 栗疫菌总RNA提取 | 第24-25页 |
| 2.3.6 1~(st)-Strand cDNA合成反应 | 第25页 |
| 2.3.7 RT-PCR反应 | 第25页 |
| 2.3.8 PCR产物与T载体的连接、转化与验证 | 第25页 |
| 2.3.9 栗疫菌蛋白激发子PECp1的生物信息学分析 | 第25-26页 |
| 2.3.10 原核表达载体构建 | 第26-28页 |
| 2.3.11 PECp1融合蛋白诱导表达 | 第28页 |
| 2.3.12 表达产物的电泳检测 | 第28-29页 |
| 2.3.13 重组蛋白的生物功能测定 | 第29-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-49页 |
| 3.1 DNA目的片段扩增 | 第32-33页 |
| 3.2 板栗疫菌总RNA的检测 | 第33页 |
| 3.3 CDNA片段扩增 | 第33-36页 |
| 3.4 蛋白激发子PECP1的生物信息学分析 | 第36-39页 |
| 3.5 栗疫菌激发子原核表达载体构建鉴定 | 第39-40页 |
| 3.6 融合蛋白的优化表达 | 第40-42页 |
| 3.6.1 蛋白表达的可溶性分析 | 第40-41页 |
| 3.6.2 蛋白表达的优化 | 第41-42页 |
| 3.7 重组蛋白生物功能测定 | 第42-49页 |
| 3.7.1 重组蛋白对植物发芽的影响 | 第42-43页 |
| 3.7.2 重组蛋白对植物根的影响 | 第43-44页 |
| 3.7.3 重组蛋白对植物幼苗生长的影响 | 第44-46页 |
| 3.7.4 重组蛋白对植物过氧化物酶的影响 | 第46页 |
| 3.7.5 重组蛋白对植物根系活力的影响 | 第46-47页 |
| 3.7.6 重组蛋白对植物过氧化氢酶的影响 | 第47页 |
| 3.7.7 重组蛋白对植物丙二醛的影响 | 第47-49页 |
| 4 结论与讨论 | 第49-52页 |
| 4.1 栗疫菌蛋白激发子的克隆 | 第49页 |
| 4.2 栗疫菌蛋白激发子的生物信息学分析 | 第49-50页 |
| 4.3 栗疫菌蛋白激发子的表达 | 第50-51页 |
| 4.4 栗疫菌蛋白激发子生物功能分析 | 第51-52页 |
| 5 展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 附录 | 第62页 |