| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 1 绪论 | 第12-20页 |
| ·研究的目的与意义 | 第12-13页 |
| ·MYB转录因子研究进展 | 第13-18页 |
| ·MYB转录因子概述 | 第13页 |
| ·MYB转录因子的表达调控机制 | 第13-14页 |
| ·MYB转录因子的生物学功能 | 第14-17页 |
| ·MYB转录因子的克隆及遗传转化 | 第17页 |
| ·高通量测序 | 第17页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第17-18页 |
| ·本研究主要研究内容与技术路线 | 第18-20页 |
| ·主要研究内容 | 第18-19页 |
| ·技术路线 | 第19-20页 |
| 2 慈竹MYB转录因子全长的克隆 | 第20-56页 |
| ·试验材料与主要仪器 | 第20-22页 |
| ·试验材料 | 第20页 |
| ·试验用主要仪器 | 第20-21页 |
| ·试验用主要试剂和菌种 | 第21-22页 |
| ·试验用其它主要试剂的配制 | 第22页 |
| ·试验方法 | 第22-29页 |
| ·慈竹笋总RNA的提取 | 第22-23页 |
| ·慈竹笋cDNA的合成 | 第23-24页 |
| ·慈竹MYB转录因子基因全长克隆 | 第24-27页 |
| ·慈竹MYB基因的生物信息学分析 | 第27-29页 |
| ·结果分析 | 第29-55页 |
| ·慈竹MYB基因的全长克隆 | 第29-35页 |
| ·慈竹MYB基因生物信息学分析 | 第35-55页 |
| ·讨论与结论 | 第55-56页 |
| 3 慈竹MYB基因的组织表达模式分析 | 第56-62页 |
| ·试验材料与仪器 | 第56页 |
| ·植物材料 | 第56页 |
| ·主要仪器 | 第56页 |
| ·药品 | 第56页 |
| ·试验方法 | 第56-58页 |
| ·慈竹各组织总RNA的提取 | 第56页 |
| ·慈竹各组织cDNA的合成 | 第56页 |
| ·慈竹BeMYB1、BeMYB2和Tublin基因Real-time PCR引物设计 | 第56-57页 |
| ·Real-time PCR 引物特异性检测 | 第57页 |
| ·Real-Time PCR反应体系与程序 | 第57-58页 |
| ·数据统计 | 第58页 |
| ·结果与分析 | 第58-61页 |
| ·RNA纯度和完整性 | 第58-59页 |
| ·慈竹MYB基因表达分析 | 第59-61页 |
| ·讨论与结论 | 第61-62页 |
| 4 慈竹MYB基因的胁迫诱导表达分析 | 第62-70页 |
| ·试验材料与方法 | 第62-65页 |
| ·植物材料 | 第62页 |
| ·主要仪器及耗材 | 第62页 |
| ·实验试剂及药品 | 第62页 |
| ·试验方法 | 第62-65页 |
| ·结果与分析 | 第65-66页 |
| ·BeMYB1、BeMYB2基因非生物胁迫诱导表达分析 | 第65-66页 |
| ·讨论与结论 | 第66-70页 |
| 5 慈竹MYB转录因子过表达载体构建 | 第70-79页 |
| ·试验材料及仪器 | 第70页 |
| ·试验用主要试剂、菌种及质粒 | 第70页 |
| ·试验用其他主要试剂的配制 | 第70页 |
| ·试验用主要仪器 | 第70页 |
| ·试验方法 | 第70-75页 |
| ·设计MYB转录因子全长（含酶切位点）PCR引物 | 第70页 |
| ·BeMYB1和BeMYB2基因全长（含酶切位点）的扩增 | 第70-71页 |
| ·BeMYB1和BeMYB2全长基因（含酶切位点）PCR产物的胶回收与连接 | 第71-72页 |
| ·大肠杆菌DH5α 感受态细胞的制备 | 第72页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第72页 |
| ·蓝白斑筛选、摇菌和质粒提取 | 第72页 |
| ·pGM-T-BeMYB1质粒、pMD19-T-BeMYB2质粒和pCAMBIA 1303质粒双酶切 | 第72-73页 |
| ·pGM-T-BeMYB1质粒、pMD19-T-BeMYB2质粒和pCAMBIA 1303质粒酶切胶回收 | 第73页 |
| ·过表达载体pCAMBIA 1303-BeMYB1和pCAMBIA 1303-BeMYB2的构建 | 第73-75页 |
| ·结果分析 | 第75-78页 |
| ·BeMYB1和BeMYB2基因全长（含酶切位点）扩增 | 第75-76页 |
| ·pGM-T-BeMYB1质粒、pMD19-T-BeMYB2质粒和pCAMBIA 1303质粒双酶切 | 第76-77页 |
| ·BeMYB1和BeMYB2基因过表达载体的构建 | 第77-78页 |
| ·结论 | 第78-79页 |
| 6 慈竹PCAMBIA 1303-BEMYB1过表达载体遗传转化烟草 | 第79-92页 |
| ·试验材料及试剂 | 第79-81页 |
| ·试验材料 | 第79页 |
| ·菌种及质粒 | 第79页 |
| ·主要试剂的配制 | 第79-80页 |
| ·培养基 | 第80页 |
| ·实验仪器 | 第80-81页 |
| ·试验方法 | 第81-86页 |
| ·pCAMBIA 1303-BeMYB1质粒转化农杆菌EHA 105 | 第81-82页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第82页 |
| ·抗性再生植株的诱导分化与生根筛选 | 第82页 |
| ·转基因烟草阳性植株的验证 | 第82-86页 |
| ·结果分析 | 第86-92页 |
| ·pCAMBIA 1303-BeMYB1质粒转化农杆菌EHA 105 | 第86-87页 |
| ·转BeMYB1基因烟草GFP基因的PCR检测 | 第87页 |
| ·转BeMYB1基因烟草植株半定量R-T PCR | 第87页 |
| ·烟草组织化学染色 | 第87-90页 |
| ·转BeMYB1基因烟草植株表型观察与统计 | 第90页 |
| ·转BeMYB1基因烟草植株木质素、纤维素含量测定 | 第90-92页 |
| 7 慈竹PCAMBIA 1303-BEMYB2过表达载体遗传转化烟草 | 第92-98页 |
| ·试验材料及试剂 | 第92页 |
| ·试验材料 | 第92页 |
| ·菌种及质粒 | 第92页 |
| ·主要试剂的配制 | 第92页 |
| ·培养基 | 第92页 |
| ·实验仪器 | 第92页 |
| ·试验方法 | 第92-93页 |
| ·pCAMBIA 1303-BeMYB2质粒转化农杆菌EHA 105 | 第92-93页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第93页 |
| ·抗性再生植株的诱导分化与生根筛选 | 第93页 |
| ·转基因烟草阳性植株的验证 | 第93页 |
| ·结果分析 | 第93-97页 |
| ·pCAMBIA 1303-BeMYB2质粒转化农杆菌EHA 105 | 第93-94页 |
| ·转BeMYB2基因烟草GFP基因的PCR检测 | 第94-95页 |
| ·转BeMYB2基因烟草植株半定量R-T PCR | 第95-96页 |
| ·转BeMYB2基因烟草植株开花观察 | 第96-97页 |
| ·讨论 | 第97-98页 |
| 8 慈竹MYB基因RNAI表达载体构建 | 第98-114页 |
| ·试验材料及仪器 | 第98-99页 |
| ·试验试剂、菌种及质粒 | 第98页 |
| ·试验用其他主要试剂的配制 | 第98页 |
| ·试验用主要仪器 | 第98-99页 |
| ·试验方法 | 第99-108页 |
| ·PCAMBIA 2301-MYB1-RNAI、PCAMBIA2301-MYB2-RNAI载体的构建 | 第99-102页 |
| ·慈竹BeMYB1 RNAi和BeMYB2 RNAi靶基因序列的设计 | 第102页 |
| ·BeMYB1 RNAi和BeMYB2 RNAi靶序列正、反片段的扩增 | 第102-104页 |
| ·BeMYB1 RNAi和BeMYB2 RNAi靶序列片段的克隆 | 第104-105页 |
| ·构建中间过渡载体BeMYB1-RNAi-pSK和BeMYB2-RNAi-pSK | 第105-108页 |
| ·结果分析 | 第108-113页 |
| ·慈竹BeMYB1 RNAi和BeMYB2 RNAi靶序列片段扩增 | 第108页 |
| ·慈竹BeMYB1 RNAi和BeMYB2 RNAi与T载体重组质粒的酶切 | 第108-110页 |
| ·中间表达载体MYB1-pSK-RNAi和MYB2-pSK-RNAi的构建和鉴定 | 第110-111页 |
| ·RNAi植物双元表达载体pCAMBIA 2301-MYB1- RNAi和pCAMBIA2301-MYB2- RNAi的构建和鉴定 | 第111-113页 |
| ·结论 | 第113-114页 |
| 结论 | 第114-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 参考文献 | 第117-125页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文及研究成果 | 第125页 |
