| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 英文及字符缩略词表 | 第14-15页 |
| 引言 | 第15-17页 |
| 第一章 文献综述 布鲁氏菌概述 | 第17-35页 |
| 1 布鲁氏菌的病原学特征 | 第17-19页 |
| ·布鲁氏菌分类 | 第17-18页 |
| ·形态及染色特性 | 第18页 |
| ·培养及抵抗力 | 第18-19页 |
| ·致病性 | 第19页 |
| 2 布病疫情情况 | 第19-23页 |
| ·世界布病流行情况 | 第19-20页 |
| ·我国布病流行情况 | 第20页 |
| ·新疆布病流行情况 | 第20-21页 |
| ·布鲁氏菌病的防制 | 第21-22页 |
| ·鲁氏菌病根除计划 | 第22-23页 |
| 3 布鲁氏菌病的诊断方法 | 第23-25页 |
| ·细菌培养法 | 第23页 |
| ·血清学技术 | 第23-24页 |
| ·凝集反应 | 第23-24页 |
| ·补体结合试验(CFT) | 第24页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第24页 |
| ·聚合酶链反应(PCR)在布病检测中的应用 | 第24-25页 |
| ·PCR应用于布鲁氏菌抗原鉴定的研究 | 第24-25页 |
| ·PCR应用于布鲁氏菌种型的鉴定研究 | 第25页 |
| 4 布鲁氏菌主要的毒力因子 | 第25-29页 |
| ·脂多糖及合成相关的毒力基因（manb、per和gmd） | 第25-27页 |
| ·BvrR/BvrS双组分系统 | 第27页 |
| ·四型分泌系统(Type 4 secretion system,T4SS） | 第27-28页 |
| ·密度感应系统(Quorum Sensing ,QS) | 第28页 |
| ·其他毒力因子 | 第28-29页 |
| ·外膜蛋白(Major outer membrane proteins,OMPs ) | 第28页 |
| ·环β-1,2 葡聚糖(Cyclicβ-1,2-glucans,CβGs) | 第28-29页 |
| ·应激反应蛋白 | 第29页 |
| 5 布鲁氏菌病疫苗研究进展 | 第29-35页 |
| ·布鲁氏菌病主要的弱毒苗及灭活苗 | 第30-31页 |
| ·布鲁氏菌亚单位疫苗 | 第31-32页 |
| ·载体疫苗 | 第32-33页 |
| ·DNA疫苗 | 第33页 |
| ·布氏菌外膜囊泡疫苗 | 第33-35页 |
| 第二章 试验研究 | 第35-71页 |
| 实验一 羊种布鲁氏菌015株gmd、per、manb基因缺失株的构建 | 第35-53页 |
| 摘要 | 第35-36页 |
| 1 材料与方法 | 第36-44页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·菌株来源、载体 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·主要实验仪器 | 第36-37页 |
| ·培养基 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-44页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·目的基因回收 | 第38页 |
| ·目的基因与pMD19-T载体的连接 | 第38-39页 |
| ·连接产物的转化 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的菌液PCR鉴定 | 第40页 |
| ·阳性单克隆的扩繁 | 第40页 |
| ·重组质粒的提取 | 第40页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第40页 |
| ·自杀载体的构建 | 第40-41页 |
| ·重组自杀载体的酶切鉴定 | 第41页 |
| ·测序 | 第41页 |
| ·重组自杀质粒pgs、pps、pms的电转 | 第41-42页 |
| ·同源重组子的筛选 | 第42-44页 |
| 2 结果 | 第44-50页 |
| ·布鲁氏菌 015 Δgmd、Δper、Δmanb缺失株的构建 | 第44-48页 |
| ·同源重组质粒pgs、pps、pms的构建 | 第44-45页 |
| ·同源重组质粒pgs、pps、pms的酶切鉴定 | 第45-46页 |
| ·Δgmd、Δper、Δmanb的一次筛选 | 第46-47页 |
| ·Δgmd、Δper、Δmanb的二次筛选 | 第47-48页 |
| ·缺失株Δgmd、Δper、Δmanb的遗传稳定性检测 | 第48-50页 |
| 3 讨论 | 第50-51页 |
| ·同源重组子的构建 | 第50-51页 |
| ·电转条件的优化 | 第51页 |
| ·无痕敲除构建突变株 | 第51页 |
| 4 小结 | 第51-53页 |
| 实验二 羊种布鲁氏菌 015Δmanb、Δper和Δgmd缺失株的毒力评价 | 第53-62页 |
| 摘要 | 第53页 |
| 1 材料与方法 | 第53-57页 |
| ·材料 | 第53-54页 |
| ·菌株来源 | 第53-54页 |
| ·实验细胞及动物 | 第54页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-57页 |
| ·细胞培养液和PBS缓冲液的配制 | 第54页 |
| ·RAW264.7 细胞的培养 | 第54-55页 |
| ·细胞计数 | 第55页 |
| ·菌株的培养及计数 | 第55页 |
| ·Δmanb、Δper和Δgmd缺失株的毒力初步评价 | 第55-57页 |
| 2 结果 | 第57-59页 |
| ·基因缺失对布鲁氏菌毒力的影响 | 第57-58页 |
| ·缺失株在小鼠巨噬细胞RAW264.7 内的增殖 | 第57页 |
| ·缺失株在小鼠体内的存活情况 | 第57-58页 |
| ·菌株诱导机体抗体水平差异(IgG) | 第58-59页 |
| ·菌株诱导机体产生INF-γ的差异 | 第59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| ·缺失株毒力评价 | 第60页 |
| ·per、gmd和manb基因对免疫原性的影响 | 第60-61页 |
| 4 小结 | 第61-62页 |
| 实验三 布鲁氏菌gmd、per和manb基因的原核表达 | 第62-71页 |
| 摘要 | 第62页 |
| 1 材料与方法 | 第62-66页 |
| ·材料 | 第62-63页 |
| ·菌株与载体 | 第62-63页 |
| ·酶、主要试剂 | 第63页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| ·方法 | 第63-66页 |
| ·gmd、per、manb基因的扩增 | 第63-64页 |
| ·gmd、per和manb基因的连接与转化 | 第64页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第64页 |
| ·pET-28a-gmd、pET-28a-per和pET-28a-manb表达载体的构建 | 第64-65页 |
| ·gmd、per和manb蛋白的表达 | 第65页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第65-66页 |
| ·Western blot分析 | 第66页 |
| 2 结果 | 第66-69页 |
| ·目的基因的扩增 | 第66-67页 |
| ·重组表达质粒的构建及鉴定 | 第67-68页 |
| ·gmd、per和manb蛋白的表达 | 第68-69页 |
| ·Western blot验证蛋白的反应原性 | 第69页 |
| 3 讨论 | 第69-70页 |
| 4 小结 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 作者简介 | 第80页 |
| 在学期间主要参与的研究项目 | 第80页 |
| 在学期间发表的文章 | 第80-81页 |
| 附件 | 第81页 |
