| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1. 卵母细胞裂解液重编程体细胞的研究现状 | 第14-17页 |
| ·体细胞重编程 | 第14-15页 |
| ·卵母细胞裂解液重编程体细胞为多能干细胞的研究现状 | 第15页 |
| ·影响卵母细胞裂解液重编程体细胞效率的因素 | 第15-17页 |
| 2. 组蛋白变异体的研究现状 | 第17-23页 |
| ·H2A.X | 第17-19页 |
| ·H2A.Z | 第19-20页 |
| ·H2A.Bbd | 第20-22页 |
| ·MacroH2A | 第22-23页 |
| 3.结语与展望 | 第23-26页 |
| 第2章 试验研究 | 第26-54页 |
| 试验1 小鼠卵母细胞裂解液逆转化MEFs为iPSCs的研究 | 第26-35页 |
| 1. 材料 | 第27-29页 |
| ·实验动物 | 第27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27页 |
| ·主要药品及试剂 | 第27-28页 |
| ·溶液配制 | 第28-29页 |
| 2.方法 | 第29-31页 |
| ·MEFs的分离、培养和饲养层的制备 | 第29页 |
| ·小鼠GV期卵母细胞裂解液的制备 | 第29-30页 |
| ·不同浓度GV期卵母细胞裂解液逆转化MEFs为iPSCs效率的影响 | 第30-31页 |
| 3. 结果与分析 | 第31-32页 |
| ·不同浓度卵母细胞裂解液对MEFs重编程效率的影响 | 第31-32页 |
| ·TSA和 5-Aza-dC对卵母细胞裂解液重编程MEFs效率的影响 | 第32页 |
| ·小鼠GV期卵母细胞裂解液逆转化MEFs所得细胞集落的多能性鉴定 | 第32页 |
| 4. 讨论 | 第32-35页 |
| 试验2 组蛋白变异体H2A.X蛋白的重组表达及分离纯化 | 第35-43页 |
| 1. 材料 | 第35-37页 |
| ·实验动物 | 第35页 |
| ·仪器设备 | 第35页 |
| ·药品及试剂 | 第35页 |
| ·溶液配制 | 第35-37页 |
| 2. 方法 | 第37-40页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第37-39页 |
| ·重组组蛋白变异体H2A.X蛋白的分离提纯 | 第39-40页 |
| 3. 结果与分析 | 第40-42页 |
| ·质粒DNA的提取与酶切验证 | 第40-41页 |
| ·质粒转染及阳性细胞的筛选 | 第41-42页 |
| ·BCA标准曲线及蛋白浓度测定 | 第42页 |
| ·H2A.X蛋白电泳结果 | 第42页 |
| 4. 讨论 | 第42-43页 |
| 试验3 不同分化阶段小鼠细胞变异体H2A.X蛋白含量的测定 | 第43-48页 |
| 1. 材料 | 第43页 |
| ·实验动物 | 第43页 |
| ·仪器设备 | 第43页 |
| ·药品及试剂 | 第43页 |
| ·主要溶液配置 | 第43页 |
| 2. 方法 | 第43-45页 |
| ·不同阶段细胞的的获取 | 第44页 |
| ·ELISA抗原抗体包被浓度的筛选 | 第44页 |
| ·卵母细胞裂解液及早期胚胎中H2A.X含量的检测 | 第44-45页 |
| 3. 结果与分析 | 第45-46页 |
| ·早期胚胎 | 第45页 |
| ·二抗包被浓度的筛选 | 第45-46页 |
| ·ELISA标准曲线及各样品中H2A.X含量 | 第46页 |
| 4. 讨论 | 第46-48页 |
| 试验4 H2A.X对小鼠卵母细胞裂解液逆转化MEFs为iPSCs效率的影响 | 第48-54页 |
| 1. 材料 | 第48页 |
| ·实验动物 | 第48页 |
| ·仪器及设备 | 第48页 |
| ·药品及试剂 | 第48页 |
| ·溶液的配制 | 第48页 |
| 2. 方法 | 第48-50页 |
| ·第三代MEFs的复苏 | 第48-49页 |
| ·MEFs的渗透化处理 | 第49页 |
| ·不同浓度的H2A.X蛋白与卵母细胞裂解液共孵育MEFs | 第49页 |
| ·TSA、5-Aza-dC和组蛋白变异体H2A.X对卵母细胞裂解液重编程效率的影响 | 第49页 |
| ·重编程所得集落多能性鉴定 | 第49-50页 |
| 3.结果与分析 | 第50-52页 |
| ·不同浓度H2A.X蛋白与卵母细胞裂解液重编程MEFs所得细胞集落数的比 | 第50页 |
| ·TSA、5-Aza-dC和H2A.X蛋白对卵母细胞裂解液逆转化MEFs效率的影响 | 第50页 |
| ·外源性H2A.X蛋白对重编程前后MEFs和iPSCs的H2A.X蛋白水平的影响 | 第50-51页 |
| ·不同浓度H2A.X蛋白与卵母细胞裂解液逆转化MEFs所得细胞集落的多能性鉴定 | 第51-52页 |
| 4.讨论 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-66页 |
| 附录：缩略词表 | 第66-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
