| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 1 前言 | 第9-17页 |
| ·里氏木霉及其表达系统 | 第9页 |
| ·T. reesei纤维素酶系的组成 | 第9-10页 |
| ·T. reesei纤维素酶系与调控基因的关系 | 第10-14页 |
| ·纤维素酶基因转录调控因子 | 第11-12页 |
| ·T. reesei碳源阻遏蛋白 | 第12-14页 |
| ·T. reesei纤维素酶相关调控因子 | 第14页 |
| ·siRNA干扰在真菌研究中的应用 | 第14-15页 |
| ·本研究的主要目的和内容 | 第15-17页 |
| ·研究目的 | 第15-16页 |
| ·研究内容 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-31页 |
| ·材料 | 第17-20页 |
| ·菌株与质粒 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·培养基及相关溶液的配制 | 第17-19页 |
| ·主要仪器 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-31页 |
| ·T. reesei cre4干扰载体的构建 | 第20-22页 |
| ·si RNA的设计及干扰片段的合成 | 第20-21页 |
| ·cre4干扰载体p-Ppdc-si RNA-Tcbh1的构建 | 第21-22页 |
| ·T. reesei QM9414基因组DNA的提取 | 第22页 |
| ·T. reesei基因cre4过表达载体的构建 | 第22-23页 |
| ·T. reesei QM9414原生质体的制备及转化 | 第23-24页 |
| ·cre4干扰载体或过表达载体转化子的鉴定 | 第24-25页 |
| ·T. reesei的总RNA提取（Trizol法） | 第25页 |
| ·T. reesei总RNA的g DNA Eraser处理 | 第25-26页 |
| ·RNA的反转录（RT-PCR） | 第26页 |
| ·荧光定量PCR | 第26-28页 |
| ·酶活测定（滤纸酶活和CMC酶活） | 第28-29页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第29-30页 |
| ·Western Blot | 第30-31页 |
| 3 实验结果与分析 | 第31-52页 |
| ·cre4-si RNA干扰载体的构建和鉴定 | 第31页 |
| ·干扰重组菌的鉴定及干扰表达盒的完整性鉴定 | 第31-33页 |
| ·过表达载体的构建和鉴定 | 第33-34页 |
| ·cre4基因重组菌的鉴定 | 第34页 |
| ·cre4基因重组菌的SDS-PAGE分析 | 第34-35页 |
| ·Western blot检测CRE4蛋白在重组菌株中的过表达 | 第35页 |
| ·cre4干扰重组菌的滤纸酶活和CMC酶活测定 | 第35-37页 |
| ·干扰重组菌转录水平的基因相对表达量分析 | 第37-44页 |
| ·干扰重组菌总RNA的提取及定量 | 第37-38页 |
| ·q PCR分析干扰重组菌中cre4的相对表达量 | 第38-39页 |
| ·干扰cre4对cre1和ace1表达的影响 | 第39-41页 |
| ·干扰cre4对cre2和cre3表达的影响 | 第41-42页 |
| ·干扰cre4对cbh1、egl1和xyr1表达的影响 | 第42-44页 |
| ·cre4基因重组菌的滤纸酶活和CMC酶活测定 | 第44-46页 |
| ·cre4基因重组菌转录水平的cre4相对表达量分析 | 第46-52页 |
| ·cre4基因重组菌总RNA的提取及定量 | 第46页 |
| ·q PCR分析cre4基因重组菌中cre4的相对表达量 | 第46-47页 |
| ·过表达cre4对cre1和ace1表达的影响 | 第47-48页 |
| ·过表达cre4对cre2和cre3表达的影响 | 第48-50页 |
| ·过表达cre4对cbh1、egl1和xyr1表达的影响 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 附录A 英文缩略词 | 第63-64页 |
| 附录B 荧光定量PCR相关曲线 | 第64-67页 |
| 附录C 序列测序图 | 第67-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
