| 目录 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-20页 |
| 一、研究意义 | 第11-12页 |
| 二、细胞增殖 | 第12-14页 |
| 三、细胞增殖的调控 | 第14-15页 |
| 四、APC 复合体与细胞周期调控 | 第15-17页 |
| 五、植物中的 CCS52 基因家族 | 第17-18页 |
| 六、玉米中的 CCS52 基因家族 | 第18-20页 |
| 第二部分 实验结果 | 第20-79页 |
| 第一章 突变体的筛选、基因克隆及基因功能分析 | 第20-50页 |
| 一、 实验材料 | 第20-23页 |
| 1. 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2. 实验试剂和耗材 | 第21-22页 |
| 3. 实验所涉及的试剂配方 | 第22-23页 |
| 二、 实验方法 | 第23-39页 |
| 1. 玉米基因组 DNA 提取 | 第23-24页 |
| 2. 基因组 DNA 的破碎 | 第24页 |
| 3. 构建高通量测序文库 | 第24-26页 |
| 4. 高通量测序文库质量鉴定 | 第26-27页 |
| 5. 构建外显子测序文库 | 第27-30页 |
| 6. 文库定量 | 第30-31页 |
| 7. PCR 扩增 ZmCCS52B 基因外显子区域 | 第31-33页 |
| 8. 透明法观察叶片表皮细胞 | 第33页 |
| 9. 玉米 RNA 的提取和反转录 | 第33-34页 |
| 10. 大肠杆菌 DH5α热激感受态的制备 | 第34页 |
| 11.大肠杆菌 DH5α热激转化方法 | 第34-35页 |
| 12.大肠杆菌质粒小提方法 | 第35页 |
| 13.大肠杆菌质粒大提方法 | 第35-36页 |
| 14.ZmCCS52B-pRTL2-nGFP 瞬时表达载体的构建 | 第36-38页 |
| 15.玉米原生质体的提取和转化 | 第38-39页 |
| 三、 实验结果 | 第39-50页 |
| 1. 突变体筛选 | 第39-40页 |
| 2. 基因克隆 | 第40-44页 |
| 1 )EcMutMap 群体构建 | 第40页 |
| 2 )植物基因组 DNA 破碎 | 第40-41页 |
| 3 )高通量测序文库构建 | 第41页 |
| 4 )外显子捕获文库构建、文库定量及测序 | 第41-43页 |
| 5 )突变体基因的定位 | 第43-44页 |
| 3. 基因功能分析 | 第44-50页 |
| 1 )ZmCCS52B 基因家族 | 第44-45页 |
| 2 )zmccs52b 突变体的表型观察 | 第45-46页 |
| 3 )zmccs52b 突变体与 B73 野生型叶片表皮细胞的观察 | 第46-47页 |
| 4 )ZmCCS52B 的亚细胞定位 | 第47-50页 |
| 四、 讨论 | 第50页 |
| 第二章 ZmCCS52B 互作蛋白筛选 | 第50-79页 |
| 一、 实验材料 | 第50-53页 |
| 1. 质粒和菌株 | 第50-51页 |
| 2. 培养基 | 第51-52页 |
| 3. 引物 | 第52页 |
| 4. 仪器设备 | 第52-53页 |
| 5. 试剂 | 第53页 |
| 二、 实验方法 | 第53-63页 |
| 1. 大肠杆菌质粒的提取 | 第53-54页 |
| 2. ZmCCS52B 目的基因的获取 | 第54页 |
| 3. 目的片段的酶切和连接反应 | 第54-55页 |
| 4. 大肠杆菌热激感受态细胞的制备 | 第55页 |
| 5. 大肠杆菌感受态细胞转化效率的测定 | 第55-56页 |
| 6. 连接产物转化大肠杆菌 DH5a 感受态细胞 | 第56页 |
| 7. 酵母双杂交诱饵克隆 pGBKT7-ZmCCS52B 的鉴定 | 第56页 |
| 8. 酵母感受态的制备 | 第56-57页 |
| 9. 酵母转化方法 | 第57页 |
| 10. 报告基因 HIS3 和 ADE2 的检测 | 第57-58页 |
| 11.报告基因 LacZ 的检测 | 第58页 |
| 12.Trizol 法 RNA 的提取 | 第58页 |
| 13.mRNA 的分离 | 第58-59页 |
| 14.cDNA 第一链的合成 | 第59-60页 |
| 15.cDNA 第二链的合成 | 第60页 |
| 16.添加 5’接头 | 第60-61页 |
| 17.cDNA 长度分离 | 第61页 |
| 18.cDNA 与 pGADT7 载体的连接 | 第61-62页 |
| 19.电击转化大肠杆菌感受态细胞 | 第62页 |
| 20.酵母双杂交文库质量鉴定 | 第62页 |
| 21.酵母双杂交文库质粒的提取 | 第62页 |
| 22.文库的保存 | 第62-63页 |
| 三、 实验结果 | 第63-77页 |
| 1. pGBKT7-ZmCCS52B 诱饵载体构建 | 第63-64页 |
| 1 )目的基因获取 | 第63页 |
| 2 )诱饵质粒 pGBKT7-ZmCCS52B 的构建 | 第63-64页 |
| 2. pGBKT7-ZmCCS52B 诱饵载体自激活检测 | 第64-65页 |
| 3. 玉米 cDNA 酵母双杂交文库构建 | 第65-68页 |
| 1 )Trizol 法提取 RNA | 第65-66页 |
| 2 )分离纯化 mRNA | 第66-67页 |
| 3 )RNA 反转、片段分离及与 pGADT7 连接 | 第67页 |
| 4 )pGADT7-玉米-cDNA 酵母双杂交文库鉴定结果 | 第67-68页 |
| 4. 酵母双杂交文库的筛选与鉴定 | 第68-70页 |
| 1 )酵母双杂交文库筛选效率 | 第68-69页 |
| 2 )His 和 Ade 报告基因的检测 | 第69-70页 |
| 3 )LacZ 报告基因的检测 | 第70页 |
| 5. 酵母双杂交阳性克隆 DNA 的提取与鉴定 | 第70-72页 |
| 6. 回转验证 | 第72-73页 |
| 1 )His 和 Ade 报告基因的检测结果 | 第72-73页 |
| 2 )LacZ 报告基因的检测结果 | 第73页 |
| 7. ZmCCS52B 互作蛋白功能预测 | 第73-77页 |
| 四、 讨论 | 第77-79页 |
| 第三部分 参考文献 | 第79-83页 |
| 第四部分 致谢 | 第83页 |
