| 缩略词表 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 前言 | 第13-21页 |
| 1. 肿瘤内皮标志物 8——TEM8 | 第13-17页 |
| 2. 表皮生长因子受体——EGFR | 第17-20页 |
| 3. 尿型纤溶酶原激活剂——uPA | 第20-21页 |
| 第一部分 uPA、TEM8 及 EGFR 间的相互作用研究 | 第21-36页 |
| 1. 材料和仪器 | 第21-23页 |
| 2. 方法 | 第23-28页 |
| ·TEM8-Fc 蛋白的制备 | 第23-24页 |
| ·流式细胞术实验验证 uPA 与 TEM8 间相互作用 | 第24-25页 |
| ·基因沉默实验验证 uPA 与 TEM8 间相互作用 | 第25页 |
| ·免疫沉淀实验证明 uPA 与 TEM8 间相互作用 | 第25-26页 |
| ·ELISA 实验验证 uPA 与 TEM8 体外相互作用 | 第26-27页 |
| ·免疫荧光实验证明 uPA 促进 TEM8 与 EGFR 间相互作用 | 第27页 |
| ·免疫沉淀实验证明 uPA 促进 TEM8 与 EGFR 间相互作用 | 第27-28页 |
| 3. 结果 | 第28-35页 |
| ·TEM8-Fc 蛋白的制备 | 第28-30页 |
| ·流式细胞术分析 | 第30页 |
| ·基因沉默实验验证 uPA 与 TEM8 间相互作用 | 第30-31页 |
| ·免疫沉淀实验证明 TEM8 与 uPA 间相互作用 | 第31-32页 |
| ·ELISA 实验验证 uPA 与 TEM8 体外相互作用 | 第32-33页 |
| ·免疫荧光实验证明 uPA 促进 TEM8 与 EGFR 间相互作用 | 第33-34页 |
| ·免疫沉淀实验证明 uPA 促进 TEM8 与 EGFR 间相互作用 | 第34-35页 |
| 4. 小结 | 第35-36页 |
| 第二部分 过表达 TEM8、EGFR 的 HEK293F 细胞系的构建 | 第36-46页 |
| 1. 材料和仪器 | 第36-37页 |
| 2. 方法 | 第37-40页 |
| ·TEM8 基因真核表达载体 pcDNA3.1(+)-TEM8-EGFP 的构建 | 第37-38页 |
| ·EGFR 基因真核表达载体 pcDNA3.1(+)-EGFR-RFP 的构建 | 第38页 |
| ·重组细胞系 TEM8-EGFP/HEK293F 和 EGFR-RFP/HEK293F 的单克隆筛选 | 第38-39页 |
| ·双转染 TEM8-EGFR/HEK293F 细胞系的单克隆筛选 | 第39-40页 |
| ·筛选细胞系的 Western blotting 印迹分析 | 第40页 |
| 3. 结果 | 第40-45页 |
| ·重组质粒 pcDNA3.1(+)-TEM8-EGFP 的构建、酶切鉴定及 DNA 序列测定 | 第40-41页 |
| ·重组质粒 pcDNA3.1(+)-EGFR-RFP 的构建及酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组质粒在 HEK293F 细胞中的表达 | 第42-44页 |
| ·细胞的蛋白表达鉴定 | 第44-45页 |
| 4. 小结 | 第45-46页 |
| 第三部分 uPA 刺激下 EGFR 的磷酸化作用研究 | 第46-52页 |
| 1. 材料和仪器 | 第46-47页 |
| 2. 方法 | 第47-49页 |
| ·肿瘤细胞中 EGFR 磷酸化的研究 | 第47-48页 |
| ·基因沉默 TEM8 测定 uPA 刺激下 EGFR 的磷酸化 | 第48页 |
| ·过表达细胞系磷酸化的研究 | 第48-49页 |
| 3. 结果 | 第49-51页 |
| ·磷酸化 WB 实验刺激时间的确定 | 第49页 |
| ·uPA 刺激肿瘤细胞中 EGFR Y1173、Y845 位的磷酸化 | 第49-50页 |
| ·肿瘤细胞中 EGFR 其它磷酸化位点的磷酸化 | 第50页 |
| ·基因沉默 TEM8 测定 uPA 刺激下 EGFR 的磷酸化 | 第50-51页 |
| ·uPA 刺激过表达细胞系 EGFR 的磷酸化 | 第51页 |
| 4. 小结 | 第51-52页 |
| 第四部分 TEM8 入核现象的探究 | 第52-57页 |
| 1. 材料和仪器 | 第52-53页 |
| 2. 方法 | 第53-54页 |
| ·免疫荧光实验证明 uPA 促进 TEM8 进入细胞核内 | 第53-54页 |
| ·核质分离实验 | 第54页 |
| 3. 结果 | 第54-56页 |
| ·免疫荧光实验证明 uPA 促进 TEM8 进入细胞核内 | 第54-55页 |
| ·核质分离实验 | 第55-56页 |
| 4. 小结 | 第56-57页 |
| 讨论 | 第57-62页 |
| 1. TEM8 与 uPA 相互作用的讨论 | 第57-58页 |
| 2. TEM8 与 EGFR 间的相互作用 | 第58-60页 |
| 3. EGFR 磷酸化的研究 | 第60-61页 |
| 4. TEM8 入核现象的探究 | 第61-62页 |
| 结论 | 第62-64页 |
| 1. 确定了 TEM8 与 uPA、EGFR 的相互作用 | 第62页 |
| 2. 确定了 TEM8 在 uPA 诱导 EGFR 磷酸化过程中的促进作用 | 第62-63页 |
| 3. 发现了 TEM8 的入核现象 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 综述 | 第69-77页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 个人简历 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
