| 摘要 | 第1-11页 |
| Summary | 第11-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-35页 |
| 1. 引言 | 第15页 |
| 2. 果实成熟过程中生理的研究进展 | 第15-27页 |
| ·果实成熟过程中物质的变化 | 第15-19页 |
| ·果实成熟过程中的质地变化 | 第15-16页 |
| ·果实成熟过程中细胞壁结构的变化 | 第16-17页 |
| ·果实成熟过程中细胞及细胞壁主要成分的降解 | 第17-19页 |
| ·主要细胞壁水解酶与果实成熟软化的关系 | 第19-24页 |
| ·多聚半乳糖醛酸酶（PG） | 第19-22页 |
| ·果胶果酯酶（PE）的变化 | 第22-23页 |
| ·纤维素酶（Cx-cellulase） | 第23页 |
| ·淀粉酶、糖苷酶的变化 | 第23-24页 |
| ·乙烯与果实成熟软化的关系 | 第24-27页 |
| ·乙烯的生物合成及其调控 | 第24-25页 |
| ·乙烯生物合成中的关键酶 | 第25-27页 |
| 3. 调控果实成熟老化的基因工程技术 | 第27-29页 |
| ·反义基因技术 | 第27页 |
| ·RNA 干扰技术 | 第27-29页 |
| 4. 桃组织培养及遗传转化研究进展 | 第29-33页 |
| ·桃组织培养研究进展 | 第30-32页 |
| ·茎尖培养 | 第30-31页 |
| ·胚培养 | 第31-32页 |
| ·其它类型的外植体培养 | 第32页 |
| ·桃遗传转化研究进展 | 第32-33页 |
| ·农杆菌介导法转化桃 | 第32-33页 |
| ·基因枪轰击法转化桃 | 第33页 |
| 5. 立题依据、目的意义和研究内容 | 第33-35页 |
| 第二章 桃果实成熟过程中果实物质变化与 ACO 和 PG 基因表达 | 第35-49页 |
| 1 材料与试剂 | 第35页 |
| ·植物材料 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| 2 试验方法 | 第35-40页 |
| ·果实品质评估 | 第35-36页 |
| ·植物化学分析 | 第36-38页 |
| ·提取物的制备 | 第36页 |
| ·总酚含量分析 | 第36页 |
| ·类黄铜含量分析 | 第36-37页 |
| ·花青素含量分析 | 第37页 |
| ·维生素 C 含量分析 | 第37页 |
| ·芳香挥发性物质的分离和分析 | 第37页 |
| ·抗氧化能力的分析 | 第37-38页 |
| ·基因表达分析 | 第38-40页 |
| ·桃果实 RNA 的提取 | 第38-39页 |
| ·引物的设计与合成 | 第39页 |
| ·qPCR 分析 | 第39-40页 |
| ·数据统计分析 | 第40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-45页 |
| ·果实品质的变化 | 第40-41页 |
| ·不同发育时期桃果肉中总酚、类黄酮、花青素和维生素 C 的变化 | 第41-42页 |
| ·果肉芳香挥发物结构的变化 | 第42-43页 |
| ·果肉的抗氧化能力的变化 | 第43-44页 |
| ·桃不同发育阶段中 ACO 和 PG 基因表达变化 | 第44-45页 |
| ·基因表达和果实品质、代谢成分和抗氧化能力的关系 | 第45页 |
| 4 讨论 | 第45-49页 |
| 第三章 桃 PG 基因的克隆与其 hpRNA 表达载体的构建 | 第49-68页 |
| 1 材料与试剂 | 第49-51页 |
| ·植物材料 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| ·载体及菌株 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| ·主要试剂溶液的配制 | 第49-50页 |
| ·引物的设计与合成 | 第50-51页 |
| 2 试验方法 | 第51-61页 |
| ·桃 PG 基因的克隆 | 第51-56页 |
| ·桃基因组 DNA 的提取 | 第51-52页 |
| ·基因组 DNA 的 PCR 扩增 | 第52页 |
| ·目的片段的回收 | 第52-53页 |
| ·目的片段与 T 载体的连接 | 第53页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第53-54页 |
| ·连接产物的转化 | 第54页 |
| ·阳性克隆的筛选和鉴定 | 第54-56页 |
| ·目的 DNA 片段的测序与序列分析 | 第56页 |
| ·hpRNA 表达载体的构建 | 第56-61页 |
| ·技术路线 | 第56-57页 |
| ·方法 | 第57-61页 |
| ·含 pCAMBIA2300 质粒的菌株复苏与质粒 DNA 提取 | 第57-58页 |
| ·中间载体 pCAMBIA2300-PG1 的构建 | 第58-59页 |
| ·RNAi 表达载体 pCAMBIA2300-PG 的构建 | 第59-60页 |
| ·构建好的植物表达载体向农杆菌中的转化 | 第60-61页 |
| 3 结果与分析 | 第61-66页 |
| ·桃基因组 DNA 的提取 | 第61-62页 |
| ·电泳检查 PCR 扩增产物 | 第62页 |
| ·PCR 产物的回收与鉴定 | 第62-63页 |
| ·阳性克隆的测序及分析 | 第63-65页 |
| ·反义基因 pCAMBIA2300-PG1 的鉴定 | 第65页 |
| ·载体 pCAMBIA2300-PG 的构建 | 第65-66页 |
| 4. 讨论 | 第66-68页 |
| 第四章 桃 ACO 基因的克隆与其 hpRNA 表达载体的构建 | 第68-80页 |
| 1 材料与试剂 | 第68页 |
| ·植物材料 | 第68页 |
| ·试剂、载体、菌株及主要仪器 | 第68页 |
| ·主要试剂溶液的配制 | 第68页 |
| ·引物的设计与合成 | 第68页 |
| 2 试验方法 | 第68-75页 |
| ·桃 ACO 基因的克隆 | 第68-70页 |
| ·桃基因组 DNA 的提取 | 第68页 |
| ·基因组 DNA 的 PCR 扩增 | 第68-69页 |
| ·目的片段的回收 | 第69页 |
| ·目的片段与 T 载体的连接 | 第69-70页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第70页 |
| ·连接产物的转化 | 第70页 |
| ·阳性克隆的筛选和鉴定 | 第70页 |
| ·目的 DNA 片段的测序与序列分析 | 第70页 |
| ·hpRNA 表达载体的构建 | 第70-75页 |
| ·技术路线 | 第70-72页 |
| ·方法 | 第72-75页 |
| ·含 pCAMBIA2300 质粒的菌株复苏与质粒 DNA 提取 | 第72页 |
| ·中间载体 pCAMBIA2300-ACO1 的构建 | 第72-73页 |
| ·RNAi 表达载体 pCAMBIA2300-ACO 的构建 | 第73-74页 |
| ·构建好的植物表达载体向农杆菌中的转化 | 第74-75页 |
| 3 结果与分析 | 第75-78页 |
| ·电泳检查 PCR 扩增产物 | 第75页 |
| ·阳性克隆的测序及分析 | 第75-77页 |
| ·ACO 干扰载体的构建 | 第77-78页 |
| 4. 讨论 | 第78-80页 |
| 第五章 根癌农杆菌介导 ACO 基因 hpRNA 表达载体对番茄的遗传转化 | 第80-100页 |
| 1 材料与方法 | 第80-85页 |
| ·番茄高效再生体系的建立 | 第80-81页 |
| ·种子的消毒与接种 | 第80页 |
| ·不同外植体对番茄愈伤组织和不定芽诱导的影响 | 第80页 |
| ·不同激素配比对番茄愈伤组织和不定芽诱导的影响 | 第80页 |
| ·不定芽的生根培养 | 第80-81页 |
| ·计算公式 | 第81页 |
| ·根癌农杆菌介导的 ACO 基因 hpRNA 表达载体对番茄的转化 | 第81-85页 |
| ·材料 | 第81-82页 |
| ·试验方法 | 第82-84页 |
| ·农杆菌工程菌液制备 | 第82页 |
| ·抗生素敏感性试验 | 第82-83页 |
| ·遗传转化系统的试验 | 第83-84页 |
| ·转基因植株的 PCR 检测 | 第84-85页 |
| 2 结果与分析 | 第85-95页 |
| ·番茄高效再生体系的建立 | 第85-88页 |
| ·浸泡、不同消毒方式对番茄种子灭菌及萌发的影响 | 第85页 |
| ·不同激素配比对番茄愈伤组织和不定芽诱导的影响 | 第85-87页 |
| ·不同激素浓度对番茄外植体生根的影响 | 第87-88页 |
| ·根癌农杆菌介导的 ACO 基因 hpRNA 表达载体对番茄的转化 | 第88-95页 |
| ·抗生素敏感性试验 | 第88-90页 |
| ·头孢霉素对组培苗生长的抑制效果 | 第88-89页 |
| ·头孢霉素对农杆菌的抑制效果 | 第89页 |
| ·卡那霉素对番茄组培苗生长的影响 | 第89页 |
| ·卡那霉素对番茄叶片再生的影响 | 第89-90页 |
| ·暗预培养过的叶片在含卡那 30 mg/L 的再生培养基上的再生情况 | 第90页 |
| ·遗传转化条件的优化 | 第90-94页 |
| ·预培养时间对遗传转化的影响 | 第90-91页 |
| ·AS（乙酰丁香酮）浓度对遗传转化的影响 | 第91页 |
| ·菌液浓度对遗传转化的影响 | 第91-92页 |
| ·侵染时间对遗传转化的影响 | 第92页 |
| ·不同共培养时间对遗传转化的影响 | 第92-93页 |
| ·不同脱菌方式对抑菌效果的影响 | 第93-94页 |
| ·转化植株的检测 | 第94-95页 |
| 3 讨论 | 第95-100页 |
| 第六章 桃胚直接诱导不定芽再生体系的建立及遗传转化 | 第100-113页 |
| 1 材料与试剂 | 第100-101页 |
| ·植物材料 | 第100页 |
| ·试剂 | 第100页 |
| ·菌株与质粒 | 第100页 |
| ·实验仪器 | 第100页 |
| ·培养基 | 第100-101页 |
| ·基本培养基 | 第100-101页 |
| ·培养基类型 | 第101页 |
| ·农杆菌培养基 | 第101页 |
| 2. 实验方法 | 第101-106页 |
| ·桃胚直接诱导不定芽再生体系的建立 | 第101-103页 |
| ·果实的选取 | 第101-102页 |
| ·种胚的处理 | 第102页 |
| ·培养基 | 第102页 |
| ·种胚的培养 | 第102-103页 |
| ·根癌农杆菌介导的桃胚遗传转化 | 第103-104页 |
| ·抗生素敏感性试验 | 第103页 |
| ·农杆菌的活化培养 | 第103页 |
| ·遗传转化 | 第103-104页 |
| ·转基因植株检测 | 第104-106页 |
| ·转化植株与非转化植株 DNA 的提取 | 第104页 |
| ·PCR 扩增 | 第104页 |
| ·Southern 印记杂交检测 | 第104-106页 |
| 3. 结果与分析 | 第106-110页 |
| ·桃胚直接诱导不定芽再生体系的建立 | 第106-108页 |
| ·幼胚发育天数对种胚萌发率的影响 | 第106页 |
| ·不同消毒时间对种胚萌发率的影响 | 第106-107页 |
| ·不同激素配比对种胚直接诱导分化的影响 | 第107-108页 |
| ·遗传转化 | 第108-110页 |
| ·卡那霉素敏感性试验 | 第108页 |
| ·预培养时间对转化的影响 | 第108-109页 |
| ·农杆菌菌液浓度和侵染时间对转化的影响 | 第109页 |
| ·共培养时间对转化的影响 | 第109-110页 |
| ·转化植株的检测 | 第110页 |
| ·PCR 检测 | 第110页 |
| ·Southern 杂交检测 | 第110页 |
| 4. 讨论 | 第110-113页 |
| 第七章 讨论 | 第113-116页 |
| ·桃果实成熟过程中 PG 基因与 ACO 基因的表达的关系 | 第113-114页 |
| ·PG 基因和 ACO 基因的表达与桃成熟过程中物质转化的关系 | 第114-115页 |
| ·PG 基因和 ACO 基因的表达与桃抗氧化能力的关系 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
| 导师简介 | 第126-127页 |
