| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-28页 |
| 1 噬菌体展示 | 第14-22页 |
| ·噬菌体展示技术的基本原理 | 第14-15页 |
| ·噬菌体展示抗体库技术 | 第15-17页 |
| ·噬菌体展示系统分类 | 第17-19页 |
| ·丝状噬菌体展示系统 | 第17-18页 |
| ·λ噬菌体展示系统 | 第18页 |
| ·T4噬菌体展示系统 | 第18页 |
| ·T7噬菌体系统 | 第18-19页 |
| ·其它展示系统 | 第19-21页 |
| ·微生物表面展示 | 第19-20页 |
| ·体外展示 | 第20-21页 |
| ·噬菌体抗体库筛选方法 | 第21-22页 |
| 2 阿特拉津 | 第22-26页 |
| ·阿特拉津的性质 | 第22-23页 |
| ·阿特拉津的应用 | 第23页 |
| ·阿特拉津残留的影响及危害 | 第23-25页 |
| ·残留分析方法 | 第25-26页 |
| 3 研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 4. 技术路线图 | 第27-28页 |
| 第二章:噬菌体免疫抗体库的构建 | 第28-42页 |
| 引言 | 第28页 |
| 1 材料与方法 | 第28-39页 |
| ·材料 | 第28-30页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29-30页 |
| ·质粒和菌株 | 第30页 |
| ·抗体库基因的制备 | 第30-35页 |
| ·提取阿特拉津免疫Balb/c小鼠脾脏总RNA | 第30-31页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第31页 |
| ·抗体基因重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的扩增 | 第31-33页 |
| ·(G4S)4 linker的制备 | 第33页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·GS-pMD18-T克隆载体的构建 | 第33-35页 |
| ·SOE-PCR连接VH、VL、GS成scFv | 第35页 |
| ·T7噬菌体展示scFv初级库的构建 | 第35-39页 |
| ·scFv片段的双酶切 | 第36页 |
| ·scFv片段与T7噬菌体载体的连接 | 第36-37页 |
| ·重组T7噬菌体载体的体外包装 | 第37页 |
| ·重组噬菌体滴度测定 | 第37-38页 |
| ·重组噬菌体的扩增 | 第38页 |
| ·初级库的PCR及测序鉴定 | 第38-39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-41页 |
| ·阿特拉津免疫小鼠脾脏总RNA的提取 | 第39页 |
| ·VH、VL的扩增及scFv的连接 | 第39-40页 |
| ·初级抗体库的滴度及库容测定 | 第40-41页 |
| ·初级库滴度测定 | 第40页 |
| ·初级抗体库的PCR鉴定 | 第40-41页 |
| ·初级抗体库的测序鉴定 | 第41页 |
| 3 讨论与结论 | 第41-42页 |
| 第三章:直接包被筛选阿特拉津特异性抗体 | 第42-61页 |
| 引言 | 第42页 |
| 1 材料与方法 | 第42-55页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第42-46页 |
| ·主要试剂 | 第42-43页 |
| ·主要实验仪器 | 第43页 |
| ·主要溶液配制 | 第43-45页 |
| ·质粒与菌株 | 第45-46页 |
| ·培养基 | 第46页 |
| ·阿特拉津的直接包被 | 第46-48页 |
| ·羧基化阿特拉津的活化 | 第47页 |
| ·96孔酶标板的氨基化处理 | 第47-48页 |
| ·ELISA测定检测阿特拉津与酶标板的偶联 | 第48页 |
| ·噬菌体展示免疫抗体库的筛选 | 第48-49页 |
| ·特异性scFv抗体的表达 | 第49-52页 |
| ·pTIG-Trx-scFv表达载体的构建 | 第49-51页 |
| ·scFv的诱导表达 | 第51-52页 |
| ·特异性scFv抗体的大量表达与纯化 | 第52-53页 |
| ·超声破碎细胞 | 第52页 |
| ·HisTrap HP柱纯化scFv蛋白 | 第52-53页 |
| ·特异scFv的性质鉴定 | 第53-55页 |
| ·直接ELISA测定scFv的结合活性 | 第53-54页 |
| ·间接竞争ELISA测定其特异性 | 第54-55页 |
| 2 结果与讨论 | 第55-60页 |
| ·羧基化阿特拉津的活化 | 第55-56页 |
| ·阿特拉津直接包被浓度的优化 | 第56页 |
| ·抗阿特拉津噬菌体的富集 | 第56-57页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定及测序 | 第57页 |
| ·scFv的表达 | 第57-59页 |
| ·Anti-Atrazine scFv的活性和特性性鉴定 | 第59-60页 |
| ·直接ELISA鉴定Anti-Atrazine scFvs的结合活性 | 第59页 |
| ·竞争ELISA鉴定Anti-Atrazine scFvs的特异性 | 第59-60页 |
| 3 小结 | 第60-61页 |
| 第四章:磁珠法筛选阿特拉津特异性抗体 | 第61-71页 |
| 引言 | 第61页 |
| 1 材料与方法 | 第61-65页 |
| ·仪器和试剂 | 第61页 |
| ·阿特拉津与磁珠的偶联 | 第61-62页 |
| ·阿特拉津与磁珠偶联 | 第61-62页 |
| ·偶联磁珠ELISA的鉴定 | 第62页 |
| ·噬菌体展示免疫抗体库的筛选 | 第62页 |
| ·特异噬菌体的挑选 | 第62-64页 |
| ·噬菌体ELISA测定噬菌体的结合活性 | 第62-63页 |
| ·间接竞争ELISA测定噬菌体竞争活性 | 第63-64页 |
| ·特异性scFv抗体的表达 | 第64页 |
| ·特异性scFv抗体的大量表达与纯化 | 第64页 |
| ·特异scFv的性质鉴定 | 第64-65页 |
| 2 结果与讨论 | 第65-70页 |
| ·阿特拉津与磁珠的偶联 | 第65页 |
| ·抗阿特拉津噬菌体的富集 | 第65-66页 |
| ·特异噬菌体的挑选 | 第66-68页 |
| ·scFv-15的表达及纯化 | 第68-69页 |
| ·scFv-15的性质鉴定 | 第69-70页 |
| ·scFv-15的结合活性测定 | 第69页 |
| ·scFv-15的竞争活性测定 | 第69-70页 |
| 小结 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
