| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 英文缩略表 | 第13-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-26页 |
| ·传染性海绵状脑病概论 | 第16-19页 |
| ·朊蛋白的基因结构 | 第16-17页 |
| ·朊蛋白的结构特征 | 第17页 |
| ·PrP~c与PrP~(SC)的区别 | 第17页 |
| ·朊蛋白的生理功能 | 第17-19页 |
| ·浮舰蛋白的研究进展 | 第19-21页 |
| ·浮舰蛋白的结构特征 | 第19-20页 |
| ·浮舰蛋白的生理功能 | 第20-21页 |
| ·细胞型朊蛋白与浮舰蛋白相互作用对细胞信号转导的影响 | 第21页 |
| ·其他分子与朊病毒的相互作用 | 第21-23页 |
| ·卵巢细胞内PRP~C和FLOTILLIN的研究现状 | 第23-24页 |
| ·本研究的目的和技术路线 | 第24-26页 |
| 第二章 KOZAK序列的选择与分析 | 第26-39页 |
| ·重组表达载体的构建和制备 | 第26-33页 |
| ·试验材料 | 第26-28页 |
| ·载体、模板及菌株 | 第26页 |
| ·酶和主要生化试剂 | 第26页 |
| ·实验室器材 | 第26-27页 |
| ·实验所需的溶液及配方 | 第27-28页 |
| ·引物设计 | 第28-29页 |
| ·CAT基因的扩增 | 第29页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第29-30页 |
| ·双酶切 | 第30-31页 |
| ·连接 | 第31页 |
| ·转化 | 第31-32页 |
| ·双酶切及测序鉴定 | 第32-33页 |
| ·去内毒素的无菌质粒的制备 | 第33页 |
| ·重组质粒的表达与鉴定 | 第33-37页 |
| ·实验材料 | 第33-34页 |
| ·质粒和细胞 | 第33页 |
| ·实验所需的生化试剂 | 第33-34页 |
| ·实验器材及设备 | 第34页 |
| ·细胞转染 | 第34-35页 |
| ·细胞回收 | 第35页 |
| ·Western-Blot分析 | 第35-36页 |
| ·实验材料 | 第35页 |
| ·实验所需试剂 | 第35页 |
| ·实验器材和设备 | 第35页 |
| ·实验所需溶液 | 第35页 |
| ·电泳及转印 | 第35-36页 |
| ·产物的检测 | 第36-37页 |
| ·HIS标签的检测 | 第36页 |
| ·C-MYC标签的检测 | 第36-37页 |
| ·目的蛋白CAT的检测 | 第37页 |
| ·Western-blot检测结果 | 第37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 牛PRP、PRP25-241、FLOT1、FLOT2重组质粒的表达与鉴定 | 第39-53页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第39-43页 |
| ·实验材料 | 第39页 |
| ·载体、模板及菌株 | 第39页 |
| ·酶和主要生化试剂 | 第39页 |
| ·实验室器材 | 第39页 |
| ·实验所需的溶液及配方 | 第39页 |
| ·引物设计 | 第39-40页 |
| ·牛PrP、PrP_(25-241)、Flot-1、Flot-2基因的扩增 | 第40页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第40-41页 |
| ·双酶切 | 第41-42页 |
| ·连接 | 第42页 |
| ·转化 | 第42页 |
| ·双酶切及测序鉴定 | 第42-43页 |
| ·去内毒素的无菌质粒的制备 | 第43页 |
| ·重组质粒的表达与鉴定 | 第43-46页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·质粒和细胞 | 第43页 |
| ·实验所需的生化试剂 | 第43页 |
| ·实验器材及设备 | 第43页 |
| ·细胞转染 | 第43页 |
| ·细胞回收 | 第43-44页 |
| ·Western-blot分析 | 第44页 |
| ·实验材料 | 第44页 |
| ·实验所需试剂 | 第44页 |
| ·实验器材及设备 | 第44页 |
| ·实验所需溶液及配制 | 第44页 |
| ·电泳及转印 | 第44页 |
| ·表达产物的检测 | 第44-46页 |
| ·HIS标签的检测 | 第44-45页 |
| ·C-MYC标签的检测 | 第45-46页 |
| ·结果与讨论 | 第46页 |
| ·融合PCR扩增MFLOT-2 | 第46-51页 |
| ·融合PCR引物设计 | 第47页 |
| ·mFlot-2基因的扩增 | 第47-49页 |
| ·融合PCR产物的回收与纯化 | 第49页 |
| ·双酶切、连接、转化 | 第49页 |
| ·重组载体的双酶切及测序鉴定 | 第49-51页 |
| ·重组质粒PCDNA3.1(-)/MYC-HIS(B)-MFLOT-2的表达与鉴定 | 第51-52页 |
| ·结果与讨论 | 第52-53页 |
| 第四章 牛FLOT1重组质粒与PRP重组质粒的共转染 | 第53-62页 |
| ·实验材料 | 第53页 |
| ·细胞和模板 | 第53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·主要仪器 | 第53页 |
| ·重组质粒的表达动态分分析 | 第53-60页 |
| ·重组质粒pcDNA3.1(-)/Myc-His(B)-PrP的表达动态分析 | 第54-55页 |
| ·重组质粒pcDNA3.1(-)/Myc-His(B)-PrP25-241的表达动态分析 | 第55页 |
| ·重组质粒pcDNA3.1(-)/Myc-His(B)-Flot1的表达动态分析 | 第55-56页 |
| ·重组质粒pcDNA3.1(-)/Myc-His(B)-Flot2的表达动态分析 | 第56-57页 |
| ·重组质粒转染后不同时间点细胞形态观察 | 第57-58页 |
| ·pCMVHA-PrP、 pCMV-HA-PrP25-24i、 pCMV-HA-Flotl 及pCMV-HA-Folt2的表达及检测 | 第58-59页 |
| ·Flot1重组质粒与PrP重组质粒共转分析 | 第59-60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-62页 |
| 第五章 全文结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简介 | 第71页 |
