| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-25页 |
| ·RNA 沉默 | 第11-15页 |
| ·RNA 沉默的发现 | 第11页 |
| ·RNA 沉默的分子机理 | 第11-12页 |
| ·参与 RNA 沉默的关键组分 | 第12-15页 |
| ·病毒编码的 RNA 沉默抑制子 | 第15-21页 |
| ·RNA 沉默抑制子的作用机制 | 第15-18页 |
| ·RNA 沉默抑制子的鉴定 | 第18-19页 |
| ·RNA 沉默抑制子沉默抑制能力比较 | 第19-21页 |
| ·本研究涉及的 RNA 沉默抑制子 | 第21-23页 |
| ·火鸡疱疹病毒 HVT063 蛋白 | 第21-22页 |
| ·马铃薯 Y 病毒 HC-Pro 蛋白 | 第22-23页 |
| ·本研究的目的意义 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-42页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·植物、动物材料与病毒 | 第25页 |
| ·菌株与质粒 | 第25页 |
| ·酶、生化试剂与试剂盒 | 第25页 |
| ·实验仪器 | 第25-26页 |
| ·引物 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-42页 |
| ·基因的克隆及载体构建 | 第26-28页 |
| ·大肠杆菌中质粒的提取 | 第28-30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第30-31页 |
| ·阳性克隆筛选 | 第31页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第31-32页 |
| ·农杆菌介导的瞬时表达系统及沉默现象观察 | 第32页 |
| ·萤火虫萤光素酶 shRNA 表达载体的构建 | 第32-34页 |
| ·双萤光素酶检测体系的建立 | 第34-35页 |
| ·HVT063 随机插入突变体的获得 | 第35-36页 |
| ·mRNA 的 Northern Blot | 第36-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-59页 |
| ·双荧光素酶检测体系的建立 | 第42-46页 |
| ·双荧光素酶表达载体的构建及转化 | 第42-44页 |
| ·萤火虫荧光素酶 shRNA 表达载体的构建及转化 | 第44-46页 |
| ·PVY 不同分离物 HC-Pro 蛋白沉默抑制能力比较 | 第46-52页 |
| ·PVY HC-Pro 基因扩增及载体构建 | 第46-49页 |
| ·PVY 不同分离物 HC-Pro 蛋白沉默抑制能力比较 | 第49-52页 |
| ·HVT063 随机插入突变体沉默抑制能力比较 | 第52-59页 |
| ·HVT063 随机插入突变体的获得 | 第52-54页 |
| ·HVT063 随机插入突变体载体构建 | 第54-56页 |
| ·HVT063 随机插入突变体沉默抑制能力比较 | 第56-59页 |
| 4.讨论 | 第59-62页 |
| ·双荧光素酶检测体系比较不同 HC-Pro 沉默抑制能力 | 第59-60页 |
| ·随机插入突变分析 HVT063 沉默抑制功能 | 第60-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第72页 |
