改进重叠延伸PCR法构建高山被孢霉重组载体
| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-29页 |
| ·多不饱和脂肪酸研究概述 | 第11-13页 |
| ·多不饱和脂肪酸定义 | 第11页 |
| ·重要的多不饱和脂肪酸及其生理作用 | 第11-12页 |
| ·多不饱和脂肪酸的来源及应用 | 第12-13页 |
| ·高山被孢霉的研究概述 | 第13-19页 |
| ·高山被孢霉分类及其鉴定 | 第13-14页 |
| ·高山被孢霉脂质生产情况 | 第14-15页 |
| ·高山被孢霉中一些重要的酶类 | 第15-18页 |
| ·高山被孢霉的重要突变体 | 第18-19页 |
| ·真菌基因工程改造方法概述 | 第19-22页 |
| ·真菌改造方法 | 第19-20页 |
| ·农杆菌介导的转化方法 | 第20-21页 |
| ·同源重组敲除基因 | 第21-22页 |
| ·高山被孢霉基因工程改造体系 | 第22页 |
| ·使用 PCR 方法概述 | 第22-25页 |
| ·重叠延伸 PCR 研究概述 | 第22-23页 |
| ·侧翼片段的克隆 | 第23-25页 |
| ·立题依据 | 第25-29页 |
| ·高山被孢霉基因改造的立题依据 | 第25-27页 |
| ·、重叠延伸 PCR 改良的立题依据 | 第27-29页 |
| 2 材料和方法 | 第29-41页 |
| ·材料 | 第29-32页 |
| ·实验标本 | 第29页 |
| ·试剂 | 第29-31页 |
| ·仪器 | 第31-32页 |
| ·常用软件 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-41页 |
| ·高山被孢霉 DNA 的提取 | 第32页 |
| ·高山被孢霉 RNA 的提取及反转录 | 第32-33页 |
| ·所需用的 PCR 反应 | 第33-39页 |
| ·DNA 纯化、克隆以及载体构建 | 第39-41页 |
| ·、高山被孢霉抗性浓度的筛选 | 第41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-50页 |
| ·高山被孢霉抗性浓度的筛选 | 第41-42页 |
| ·目的基因的克隆 | 第42-46页 |
| ·基因中间片段的克隆 | 第42页 |
| ·基因侧翼序列的扩增 | 第42-44页 |
| ·ME 基因与 sdhB 基因 cDNA 的扩增 | 第44-45页 |
| ·sdhB 基因的突变 | 第45-46页 |
| ·重叠延伸 PCR 拼接序列 | 第46-49页 |
| ·载体构建 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| ·ME 基因讨论 | 第50页 |
| ·改良的重叠延伸 PCR | 第50-52页 |
| ·载体的构建 | 第52-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-64页 |
| 附录 | 第64-68页 |
| 致谢 | 第68-70页 |
| 发表论文情况 | 第70页 |
