| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 文献综述 | 第13-23页 |
| — 牛乳腺上皮细胞的培养历程及其在免疫调节中的作用 | 第13-16页 |
| 二 金黄色葡萄球菌的病原性 | 第16-19页 |
| 三 细胞调亡及细菌在细胞调亡中的作用 | 第19-23页 |
| 第一章 牛乳腺上皮细胞的分离培养及鉴定 | 第23-35页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| ·活体材料 | 第23-24页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-27页 |
| ·胶原酶消化法培养牛乳腺上皮细胞 | 第24页 |
| ·乳汁分离法培养牛乳腺上皮细胞 | 第24-25页 |
| ·牛乳腺上皮细胞的传代、冻存及复苏 | 第25页 |
| ·细胞总RNA提取、DNA消化酶处理及反转录成cDNA | 第25-26页 |
| ·MTT法测定牛乳腺上皮细胞生长曲线 | 第26页 |
| ·RT-PCR检测角蛋白8、18及β酪蛋白 | 第26-27页 |
| ·细胞免疫荧光染色法鉴定角蛋白8 | 第27页 |
| ·染色体中期分裂相制备与组型分析 | 第27页 |
| ·统计学分析方法 | 第27页 |
| ·结果 | 第27-33页 |
| ·乳汁分离法细胞形态 | 第28-29页 |
| ·胶原酶消化法细胞形态 | 第29-30页 |
| ·牛乳腺上皮细胞生长曲线 | 第30页 |
| ·RT-PCR检测角蛋白8、18及β-酪蛋白 | 第30-31页 |
| ·细胞免疫荧光染色法鉴定角蛋白8 | 第31-32页 |
| ·染色体中期分裂相制备与组型分析 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| 第二章 金黄色葡萄球菌对牛乳腺上皮细胞的凋亡诱导作用 | 第35-44页 |
| ·材料 | 第35-36页 |
| ·主要仪器设备 | 第35页 |
| ·细胞及细菌 | 第35-36页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-37页 |
| ·侵染试验 | 第36页 |
| ·扫描电镜试验 | 第36页 |
| ·透射电镜试验 | 第36-37页 |
| ·Hochest 3342染色 | 第37页 |
| ·流式细胞仪检测细胞凋亡试验 | 第37页 |
| ·统计学分析方法 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-42页 |
| ·光镜观察细胞凋亡 | 第37-38页 |
| ·扫描电镜观察细胞凋亡 | 第38-39页 |
| ·透射电镜观察细胞凋亡 | 第39-40页 |
| ·Hochest染色结果 | 第40-41页 |
| ·流式细胞仪定量检测细胞凋亡 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 供试金黄色葡萄球菌生物特性研究 | 第44-57页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·主要仪器设备 | 第44页 |
| ·细胞及细菌 | 第44-45页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-48页 |
| ·菌种的复苏及冻存 | 第45页 |
| ·菌种生长曲线测定 | 第45页 |
| ·药物敏感性试验 | 第45-46页 |
| ·金黄色葡萄球菌基因组DNA的提取 | 第46页 |
| ·PCR检测 | 第46-47页 |
| ·哥伦比亚血琼脂培养基检测溶血现象 | 第47页 |
| ·金黄色葡萄球菌对牛乳腺上皮细胞粘附能力的测定 | 第47页 |
| ·金黄色葡萄球菌对牛乳腺上皮细胞侵染能力的测定 | 第47-48页 |
| ·电镜观察金黄色葡萄球菌对牛乳腺上皮细胞的侵染粘附特性 | 第48页 |
| ·统计学分析方法 | 第48页 |
| ·结果 | 第48-55页 |
| ·金黄色葡萄球菌生长曲线 | 第48-49页 |
| ·药物敏感性试验分析 | 第49-50页 |
| ·PCR鉴定nuc基因 | 第50-51页 |
| ·PCR鉴定α-溶血素和β-溶血素基因 | 第51页 |
| ·哥伦比亚血琼脂培养基检测溶血现象 | 第51-52页 |
| ·金黄色葡萄球菌对牛乳腺上皮细胞的粘附侵染检测 | 第52-53页 |
| ·电镜观察金黄色葡萄球菌对牛乳腺上皮细胞的侵染粘附性能 | 第53-54页 |
| ·PCR鉴定ClfA、ClfB、FnbpA和FnbpB基因 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 第四章 金黄色葡萄球菌诱导牛乳腺上皮细胞凋亡信号通路的研究 | 第57-73页 |
| ·材料 | 第57-58页 |
| ·主要仪器设备 | 第57页 |
| ·细胞及细菌 | 第57-58页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第58页 |
| ·方法 | 第58-62页 |
| ·侵染试验 | 第58页 |
| ·细胞总RNA提取、DNA消化酶处理及反转录成cDNA | 第58页 |
| ·Caspase1/3/8/9蛋白活性检测 | 第58-59页 |
| ·Caspase3/8半定量检测 | 第59-60页 |
| ·Real-time PCR及ELISA检测IL-1β及TNF-α | 第60-61页 |
| ·Real-time PCR检测Myd88 | 第61页 |
| ·Western blot检测NF-κB | 第61-62页 |
| ·Real-time PCR检测死亡受体家族蛋白TRAIL、LTα、Apo3L、Fas及FADD | 第62页 |
| ·统计学分析方法 | 第62页 |
| ·结果 | 第62-71页 |
| ·Caspase1/3/8/9蛋白活性检测结果 | 第62-64页 |
| ·Caspase3/8半定量检测结果 | 第64页 |
| ·IL-1β及TNF-α的相对定量和ELISA检测结果 | 第64-67页 |
| ·Myd88的相对定量结果 | 第67-68页 |
| ·Western bolt检测NF-κB结果 | 第68-69页 |
| ·TRAIL、LTα及Apo3L的相对定量结果 | 第69-70页 |
| ·Fas及FADD的相对定量结果 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 硕士期间发表学术论文 | 第85-86页 |
| 附录 | 第86-87页 |
