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盐胁迫下拟南芥海藻糖磷酸化酶TRP的功能分析

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-10页
缩写词第10-11页
1. 前言第11-25页
   ·海藻糖的概述第11-12页
   ·海藻糖的理化性质第12页
   ·海藻糖的生物合成第12-15页
     ·TPS –TPP 途径——以葡萄糖为底物的海藻糖合成途径第12-13页
     ·TreY–TreZ 途径第13页
     ·TreS 途径——以麦芽糖为底物的海藻糖合成途径第13-14页
     ·TreT 途径——以ADP-葡萄糖为底物的海藻糖合成途径第14页
     ·TreP 途径——海藻糖磷酸化酶途径第14-15页
   ·海藻糖的降解途径第15-16页
   ·海藻糖的功能第16-18页
     ·逆境下海藻糖对生物体的保护作用第16-17页
     ·海藻糖可能起调节因子作用第17-18页
     ·能量储备、昆虫飞行能量来源第18页
     ·吸湿性第18页
   ·海藻糖的应用第18-20页
     ·在食品工业上的应用第18-19页
     ·在医药行业上的应用第19页
     ·在农业方面的应用第19-20页
     ·在分子生物学上的应用第20页
   ·海藻糖保护生物分子的机理第20-21页
     ·“水替代”假说第20页
     ·“玻璃态”假说第20页
     ·“化学稳态”假说第20-21页
   ·微生物中海藻糖磷酸化酶的研究第21页
     ·腾冲嗜热杆菌海藻搪磷酸化酶的研究第21页
     ·Brevibacterium sp.SY361 海藻糖磷酸化酶的研究第21页
   ·植物的盐胁迫第21-23页
     ·盐胁迫对植物的影响第21-22页
     ·植物的耐盐机理第22-23页
   ·海藻糖合成基因在植物中的表达应用第23页
   ·立题依据第23-25页
2. 材料与方法第25-39页
   ·实验仪器第25页
   ·实验材料第25-26页
     ·植物材料第25页
     ·质粒载体和菌株第25-26页
   ·实验试剂第26页
   ·实验常用溶液及培养基的配制第26-27页
     ·常用溶液的配制第26页
     ·常用培养基的配制第26-27页
     ·拟南芥叶肉细胞原生质体瞬时表达溶液第27页
     ·抗生素的配制第27页
   ·实验所用引物第27-28页
     ·T-DNA 插入纯和突变体鉴定引物第27-28页
     ·构建GUS 载体所用引物第28页
     ·构建tGFP 载体所用引物第28页
     ·构建超表达载体所用引物第28页
     ·RT- PCR 鉴定基因表达所用引物第28页
   ·实验方法第28-39页
     ·拟南芥的种植方法第28-29页
     ·拟南芥基因组DNA 提取方法第29页
     ·T-DNA 插入缺失纯合突变体的鉴定第29-30页
     ·拟南芥基因组总RNA 的提取(Trizol 法)第30页
     ·反转录合成拟南芥cDNA第30-31页
     ·半定量RT-PCR 检测基因表达情况第31页
     ·DNA 的琼脂糖凝胶电泳第31-32页
     ·PCR 产物以及酶切产物的回收和纯化第32页
     ·重组质粒载体的构建第32-34页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第34-35页
     ·重组质粒对大肠杆菌感受态细胞的转化第35页
     ·质粒DNA 的提取第35-36页
     ·重组质粒的鉴定第36页
     ·杆菌感受态细胞的制备及转化第36页
     ·农杆菌介导的拟南芥转化第36-37页
     ·转基因阳性植株的筛选第37页
     ·β-葡糖苷酸酶(GUS)的组织化学鉴定第37-38页
     ·PEG 介导的拟南芥叶肉细胞原生质体瞬时表达第38页
     ·共聚焦显微镜观察GFP 与叶绿体自发荧光共定位第38-39页
3. 结果与分析第39-47页
   ·T-DNA 插入突变体的鉴定和纯合体的筛选第39-40页
   ·突变体的表型鉴定第40-41页
     ·低浓度NaCl 对trp 种子萌发和幼苗生长的影响第40-41页
   ·pTRP::pCAMBIA1381-GUS 表达载体的构建第41-42页
   ·TRP::pHBT-GFP-NOS 载体的构建第42-43页
   ·TRP 蛋白的亚细胞定位分析第43-44页
   ·TRP::p-Supe11300+超表达载体的构建与验证第44-45页
   ·超表达植株的筛选及基因表达水平检测第45-47页
4. 讨论第47-49页
   ·获得了拟南芥TRP 基因的T-DNA 插入缺失纯合突变体trp第47页
   ·TRP 参与拟南芥盐胁迫应答的过程第47页
   ·TRP 在拟南芥植株中普遍表达第47-49页
5. 结论第49-51页
参考文献第51-55页
致谢第55-56页

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