| 缩略语表 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-13页 |
| 英文摘要 | 第13-17页 |
| 前言 | 第17-19页 |
| 文献回顾 | 第19-45页 |
| 空间骨丢失的发生和危害 | 第19-23页 |
| 力负荷是维持骨骼稳态的决定性因素 | 第19-20页 |
| 力负荷减少导致骨丢失的发生 | 第20-22页 |
| 空间骨丢失的危害 | 第22-23页 |
| 空间骨丢失发生的原因 | 第23-35页 |
| 空间骨丢失的生理学机制 | 第23-25页 |
| 失重对成骨细胞的影响 | 第25-28页 |
| 失重对骨髓间质干细胞的影响 | 第28-31页 |
| 失重对成骨细胞特异性转录因子Cbfa1 的影响 | 第31-35页 |
| 骨相关细胞因子对成骨细胞的影响 | 第35-42页 |
| 骨相关细胞因子对Cbfa1表达及活性的影响 | 第35-39页 |
| 失重对骨相关细胞因子的影响 | 第39-42页 |
| 本课题的目的意义 | 第42-45页 |
| 实验一 回转对细胞因子促BMSC 增殖作用的影响 | 第45-69页 |
| 1 材料 | 第45-48页 |
| ·实验动物 | 第45-46页 |
| ·实验试剂 | 第46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| ·试剂配制 | 第46-48页 |
| 2 方法 | 第48-54页 |
| ·基于红细胞裂解的BMSC 分离培养 | 第48页 |
| ·免疫细胞化学染色 | 第48-49页 |
| ·亚甲基蓝比色法 | 第49页 |
| ·细胞周期分析 | 第49页 |
| ·BMSC 的分化潜能鉴定 | 第49-50页 |
| ·BMSC 的回转和离心超重培养 | 第50页 |
| ·细胞微丝骨架染色 | 第50-51页 |
| ·蛋白表达的Western 检测 | 第51-52页 |
| ·半定量RT-PCR 分析 | 第52-53页 |
| ·基因芯片检测及基因功能分类分析 | 第53-54页 |
| ·统计方法 | 第54页 |
| 3 结果 | 第54-65页 |
| ·BMSC 的分离培养鉴定 | 第54-58页 |
| ·回转对BMSC 增殖活性的影响 | 第58-60页 |
| ·回转对BMSC 结构的影响 | 第60页 |
| ·回转对BMSC 成骨向分化的影响 | 第60-62页 |
| ·回转对细胞因子促BMSC 增殖作用的影响 | 第62-63页 |
| ·回转对BMSC 基因表达谱的影响 | 第63-65页 |
| 4 讨论 | 第65-68页 |
| 5 小结 | 第68-69页 |
| 实验二 回转对骨相关细胞因子调节CBFA1 活性的影响及其机制研究 | 第69-88页 |
| 1 材料 | 第70-72页 |
| ·细胞与载体 | 第70页 |
| ·主要试剂 | 第70页 |
| ·主要仪器 | 第70-71页 |
| ·主要试剂配置 | 第71-72页 |
| 2 方法 | 第72-75页 |
| ·6OSE2 启动子序列获取 | 第72页 |
| ·6OSE2 启动子驱动的报告基因表达载体构建 | 第72-73页 |
| ·药物最小致死浓度确定 | 第73页 |
| ·细胞脂质体转染 | 第73-74页 |
| ·细胞处理 | 第74页 |
| ·细胞荧光强度分析 | 第74页 |
| ·Luciferase 活性检测 | 第74-75页 |
| ·ALP 染色 | 第75页 |
| 3 结果 | 第75-83页 |
| ·反映Cbfa1 活性的成骨细胞模型构建 | 第75-78页 |
| ·不同重力对Cbfa1 活性的影响 | 第78-79页 |
| ·不同重力对VD3 诱导Cbfa1 活性的影响 | 第79-80页 |
| ·不同重力对VDR 和Cbfa1 相互作用的影响 | 第80页 |
| ·回转对BMP2 诱导Cbfa1 活性的影响 | 第80-81页 |
| ·微丝骨架在BMP2 诱导Cbfa1 活性中的作用 | 第81-83页 |
| 4 讨论 | 第83-87页 |
| 5. 小结 | 第87-88页 |
| 实验三 模拟失重对IGF-I 选择性剪接异构体表达的影响 | 第88-106页 |
| 1 材料 | 第89页 |
| ·细胞与载体 | 第89页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第89页 |
| 2 方法 | 第89-97页 |
| ·IGF-Ea 和MGF 基因引物设计 | 第89-90页 |
| ·组织总RNA 提取及浓度测定 | 第90页 |
| ·小鼠肌肉基因组DNA 的提取 | 第90页 |
| ·多聚酶链式反应(PCR) | 第90-91页 |
| ·酶切及连接反应 | 第91-92页 |
| ·选择性剪接载体的构建 | 第92-93页 |
| ·细胞的剪切力刺激 | 第93-95页 |
| ·实时定量RT-PCR 分析 | 第95-96页 |
| ·大鼠尾吊模拟失重效应 | 第96-97页 |
| ·血清IGF-I 的Elisa 检测 | 第97页 |
| 3 结果 | 第97-103页 |
| ·IGF-I 选择性剪接异构体的qPCR 检测方法 | 第97页 |
| ·尾吊对大鼠骨骼IGF-I 表达的影响 | 第97-99页 |
| ·尾吊对大鼠血清中IGF-I 水平的影响 | 第99页 |
| ·回转对成骨细胞IGF-I 表达的影响 | 第99-100页 |
| ·剪切力对IGF-I 选择性剪接的调控作用 | 第100-103页 |
| 4 讨论 | 第103-105页 |
| 5. 小结 | 第105-106页 |
| 结论 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-119页 |
| 附录 | 第119-120页 |
| 个人简历和研究成果 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
