| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 第一章 转录因子与造血调控 | 第15-32页 |
| ·造血过程 | 第15-17页 |
| ·造血过程概述 | 第15-16页 |
| ·造血部位的迁移 | 第16-17页 |
| ·造血分化调控 | 第17-28页 |
| ·造血微环境与造血分化调控 | 第17-19页 |
| ·转录因子与造血分化调控 | 第19-28页 |
| ·转录因子异常与恶性血液疾病 | 第28-30页 |
| ·染色体转位引起的转录因子异常 | 第28-29页 |
| ·染色体缺失引起的转录因子异常 | 第29页 |
| ·病毒感染引起的转录因子异常 | 第29-30页 |
| ·针对转录因子异常的白血病治疗方法 | 第30-32页 |
| ·阻断信号转导通路抑制转录因子表达 | 第30-31页 |
| ·RNA干扰抑制转录因子表达 | 第31-32页 |
| 第二章 锌指蛋白概述及ZNF300研究进展 | 第32-41页 |
| ·锌指蛋白及其简介 | 第32-33页 |
| ·锌指蛋白的分类 | 第33页 |
| ·锌指蛋白的功能 | 第33-37页 |
| ·锌指蛋白参与细胞增殖、分化过程 | 第33-36页 |
| ·锌指蛋白能够调节胚胎发育过程 | 第36页 |
| ·锌指蛋白能够调节疾病发生与发展 | 第36-37页 |
| ·ZNF300基因的研究现状 | 第37-41页 |
| ·ZNF300基因的筛选 | 第37页 |
| ·ZNF300基因的结构 | 第37-38页 |
| ·ZNF300基因的表达谱 | 第38-39页 |
| ·ZNF300调控的基因 | 第39页 |
| ·ZNF300的转录抑制活性 | 第39页 |
| ·ZNF300与细胞增殖 | 第39-40页 |
| ·ZNF300与造血分化及MDS | 第40-41页 |
| 第三章 ZNF300基因在急性/慢性髓系白血病患者骨髓中的蛋白表达分析 | 第41-52页 |
| 摘要 | 第41页 |
| ·前言 | 第41-42页 |
| ·实验材料及仪器 | 第42-45页 |
| ·骨髓组织材料的获取 | 第42页 |
| ·试剂盒及试剂 | 第42页 |
| ·溶液配制 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-45页 |
| ·数据分析 | 第45页 |
| ·实验结果 | 第45-50页 |
| ·病例收集 | 第45页 |
| ·ZNF300基因在髓性白血病患者骨髓细胞中的特异性表达分析 | 第45-49页 |
| ·ZNF300基因在髓性白血病患者骨髓细胞中的表达量变化分析 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 ZNF300基因潜在启动子的克隆与序列分析 | 第52-67页 |
| 摘要 | 第52页 |
| ·前言 | 第52-53页 |
| ·实验材料与仪器设备 | 第53-55页 |
| ·血样采集 | 第53页 |
| ·载体 | 第53页 |
| ·酶与试剂盒 | 第53页 |
| ·主要试剂配制 | 第53-54页 |
| ·细菌培养相关试剂配制 | 第54页 |
| ·实验仪器 | 第54-55页 |
| ·生物信息学分析软件 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-62页 |
| ·人基因组DNA提取流程 | 第55-56页 |
| ·人基因组DNA的双酶切 | 第56页 |
| ·ZNF300基因5’端启动子区域的PCR扩增 | 第56-57页 |
| ·PCR产物pGL3载体连接 | 第57-62页 |
| ·阳性克隆测序验证和序列分析 | 第62页 |
| ·实验结果 | 第62-65页 |
| ·人基因组DNA的提取和酶切 | 第63页 |
| ·ZNF300基因5’端调控区域的PCR扩增 | 第63-64页 |
| ·5’末端调控区域的克隆 | 第64-65页 |
| ·阳性克隆子的DNA测序及其序列分析 | 第65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| 第五章 ZNF300基因转录起始位点的确定 | 第67-84页 |
| 摘要 | 第67页 |
| ·前言 | 第67-68页 |
| ·实验材料 | 第68-71页 |
| ·细胞系 | 第68页 |
| ·酶与其它试剂 | 第68-69页 |
| ·溶液配制 | 第69-70页 |
| ·细菌与细胞系培养基配制 | 第70页 |
| ·主要仪器 | 第70-71页 |
| ·联网生物信息学分析工具 | 第71页 |
| ·实验方法 | 第71-78页 |
| ·生物信息学工具预测ZNF300基因的转录起始位点 | 第71页 |
| ·转录起始位点数据库DBTSS预测ZNF300基因的转录起始位点 | 第71-73页 |
| ·RT-PCR分析确定ZNF300基因转录起始位点所在区域 | 第73-75页 |
| ·引物延伸确定ZNF300基因转录起始位点 | 第75-78页 |
| ·实验结果 | 第78-82页 |
| ·不同在线工具对ZNF300基因转录起始位点进行分析 | 第78-80页 |
| ·细胞系总RNA样品的制备 | 第80页 |
| ·RT-PCR方法定位ZNF300基因转录起始位点的所在区域 | 第80-81页 |
| ·引物延伸确定ZNF300基因转录起始位点 | 第81-82页 |
| ·讨论 | 第82-84页 |
| 第六章 ZNF300基因潜在启动子顺式作用元件鉴定 | 第84-100页 |
| 摘要 | 第84页 |
| ·前言 | 第84页 |
| ·实验材料 | 第84-86页 |
| ·细胞系 | 第85页 |
| ·载体工具 | 第85页 |
| ·酶与试剂盒 | 第85页 |
| ·主要试剂 | 第85页 |
| ·主要实验仪器 | 第85-86页 |
| ·实验方法 | 第86-92页 |
| ·转录起始位点上游区域缺失突变体的构建 | 第86-87页 |
| ·定点置换突变体克隆的构建 | 第87-88页 |
| ·超纯质粒提取 | 第88-89页 |
| ·细胞培养 | 第89-90页 |
| ·细胞转染 | 第90-91页 |
| ·双荧光分析 | 第91-92页 |
| ·实验结果 | 第92-98页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定与DNA测序 | 第92页 |
| ·ZNF300基因启动子区域系列缺失突变体的启动子活性分析 | 第92-96页 |
| ·调控区域中转录因子结合位点的确定 | 第96-98页 |
| ·讨论 | 第98-100页 |
| 第七章 ZNF300基因调控区域反式作用因子的鉴定 | 第100-113页 |
| 摘要 | 第100页 |
| ·前言 | 第100页 |
| ·实验材料 | 第100-103页 |
| ·细胞系 | 第101页 |
| ·酶与试剂盒 | 第101页 |
| ·溶液配制 | 第101-102页 |
| ·主要仪器 | 第102-103页 |
| ·实验方法 | 第103-108页 |
| ·HL60与K562细胞系核抽提物的制备 | 第103页 |
| ·探针的制备 | 第103-104页 |
| ·EMSA分析 | 第104-106页 |
| ·染色质免疫沉淀反应 | 第106-108页 |
| ·实验结果 | 第108-110页 |
| ·EMSA体外鉴定PU.1对ZNF300基因启动子上游PU.1位点的结合 | 第108-110页 |
| ·ChIP实验体内鉴定PU.1对ZNF300基因启动子上游PU.1位点的结合 | 第110页 |
| ·讨论 | 第110-113页 |
| 第八章 PU.1的过表达激活ZNF300基因启动子,PU.1的沉默抑制ZNF300基因启动子活性 | 第113-124页 |
| 摘要 | 第113页 |
| ·前言 | 第113-114页 |
| ·实验材料 | 第114-116页 |
| ·细胞系 | 第114-116页 |
| ·载体工具 | 第116页 |
| ·试剂 | 第116页 |
| ·细菌与细胞系培养试剂 | 第116页 |
| ·主要仪器 | 第116页 |
| ·实验方法 | 第116-118页 |
| ·真核过表达载体的构建 | 第116-117页 |
| ·PU.1 siRNA载体的构建 | 第117页 |
| ·共转染分析 | 第117-118页 |
| ·结果与讨论 | 第118-124页 |
| ·过表达转录因子PU.1 | 第119-120页 |
| ·转录因子PU.1的RNA干扰 | 第120-121页 |
| ·讨论 | 第121-124页 |
| 第九章 ZNF300基因在白血病细胞体外诱导分化过程中的表达变化 | 第124-135页 |
| 摘要 | 第124页 |
| ·前言 | 第124-125页 |
| ·材料与方法 | 第125-129页 |
| ·细胞系 | 第125页 |
| ·试剂 | 第125页 |
| ·溶液配制 | 第125-127页 |
| ·仪器 | 第127页 |
| ·HL60细胞培养 | 第127页 |
| ·HL60细胞诱导分化 | 第127页 |
| ·瑞氏-姬姆萨染色 | 第127页 |
| ·流式细胞仪检测细胞表面分化标记分子CD11b或CD14 | 第127-128页 |
| ·Western Blot检测ZNF300在白血病细胞分化过程中的表达变化 | 第128-129页 |
| ·结果 | 第129-132页 |
| ·瑞氏-姬姆萨染色检测诱导分化细胞核型变化 | 第129-131页 |
| ·流式细胞技术检测HL60细胞表面分化标记变化 | 第131-132页 |
| ·TPA诱导HL60分化过程中ZNF300表达量的变化情况 | 第132页 |
| ·讨论 | 第132-135页 |
| 研究总结与展望 | 第135-137页 |
| 参考文献 | 第137-151页 |
| 博士研究生期间发表及待发表的论文 | 第151-152页 |
| 致谢 | 第152-153页 |
