| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 第一部分 文献综述 | 第16-31页 |
| 一、猪繁殖与呼吸综合征研究进展 | 第17-27页 |
| 1 病原学 | 第17-21页 |
| ·PRRSV的发现 | 第17页 |
| ·PRRSV的结构及生物学特征 | 第17-18页 |
| ·PRRSV的基因组结构及其编码蛋白的生物学功能 | 第18-21页 |
| 2 PRRSV流行状况与病毒变异 | 第21-22页 |
| ·易感动物 | 第22页 |
| ·传播方式 | 第22页 |
| 3 致病机制 | 第22-23页 |
| 4 PRRSV逃逸天然免疫机制 | 第23-27页 |
| ·Ⅰ型干扰素信号通路 | 第23-24页 |
| ·PRRSV逃避天然免疫策略 | 第24-27页 |
| 二、抗病毒天然免疫研究进展 | 第27-31页 |
| 1 TLR信号途径 | 第27-28页 |
| 2 RIG-1样信号途径 | 第28-29页 |
| 3 LSm14A新型病毒核酸识别受体 | 第29-31页 |
| 第二部分 试验研究 | 第31-113页 |
| 第一章 基于NSP2、GP5和N基因的PRRSV分子流行病学调查 | 第32-53页 |
| 1 材料与方法 | 第33-37页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·方法 | 第34-37页 |
| 2 结果 | 第37-51页 |
| ·NSP2基因的系统进化树分析 | 第37-42页 |
| ·GP5基因的系统进化树分析 | 第42-47页 |
| ·N基因的系统进化树分析 | 第47-51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 第二章 猪繁殖与呼吸综合征病毒对LSm14A分子的活性影响 | 第53-85页 |
| 1 材料与方法 | 第54-67页 |
| ·材料 | 第54-55页 |
| ·PLSm14A克隆与进化树分析 | 第55-56页 |
| ·pLSm14A组织表达分析 | 第56-57页 |
| ·携带FLAG标签的PLSm14A真核表达质粒构建 | 第57页 |
| ·PLSm14A高免血清制备 | 第57-59页 |
| ·细胞培养与瞬时转染 | 第59-60页 |
| ·双荧光报告基因实验 | 第60-62页 |
| ·荧光定量试验 | 第62-63页 |
| ·过量表达PLSm14A对PRRSV在MARC-145细胞内复制的影响 | 第63-65页 |
| ·PRRSV感染细胞内LSm14A的mRNA与蛋白水平变化 | 第65页 |
| ·下调内源性LSm14A表达 | 第65-66页 |
| ·下调内源性LSm14A表达对POLY(I：C)诱导的IFN-β启动子激活影响 | 第66页 |
| ·下调内源性LSm14A表达对PRRSV复制的影响 | 第66-67页 |
| 2 结果 | 第67-82页 |
| ·PLSm14A分子克隆与进化树分析 | 第67-68页 |
| ·PLSm14A分子组织表达分析 | 第68-69页 |
| ·携带FLAG标签的PLSm14A真核表达质粒构建 | 第69-70页 |
| ·PLSm14A高免血清制备 | 第70-71页 |
| ·外源PLSm14A在HEK293、MARC-145细胞中的定位 | 第71-74页 |
| ·过量表达PLSm14A激活IFN-β、NF-κB启动子 | 第74-75页 |
| ·PLSm14A呈剂量依赖式协同POLY(I：C)激活IFN-β启动子 | 第75-77页 |
| ·过量表达PLSm14A上调IFN-β mRNA水平 | 第77页 |
| ·过量表达PLSm14A不影响PRRSV在MARC-145细胞内的复制 | 第77-79页 |
| ·PRRSV感染抑制PLSm14A诱导的IFN-β启动子活性 | 第79-80页 |
| ·PRRSV感染细胞内LSm14A的mRNA与蛋白水平变化 | 第80-81页 |
| ·下调内源性LSm14A表达抑制POLY(I：C)诱导的IFN-B启动子激活 | 第81-82页 |
| ·下调内源性LSm14A表达不影响PRRSV的复制 | 第82页 |
| 3 讨论 | 第82-85页 |
| 第三章 猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞内非结构蛋白NSP2表达分析 | 第85-95页 |
| 1 材料与方法 | 第86-89页 |
| ·材料 | 第86页 |
| ·携带FLAG标签的NSP2真核表达质粒构建 | 第86-88页 |
| ·细胞培养与瞬时转染 | 第88页 |
| ·免疫荧光试验 | 第88页 |
| ·蛋白免疫印迹试验 | 第88页 |
| ·转染细胞内NSP2的定位与表达分析 | 第88-89页 |
| ·PRRSV感染细胞内NSP2的定位与表达分析 | 第89页 |
| 2 结果 | 第89-93页 |
| ·携带FLAG标签的NSP2真核表达质粒鉴定 | 第89-90页 |
| ·转染细胞内NSP2的定位与表达分析 | 第90页 |
| ·PRRSV感染细胞内NSP2的定位与表达分析 | 第90-93页 |
| 3 讨论 | 第93-95页 |
| 第四章 猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2下调IFN-p机制的初步探索 | 第95-113页 |
| 1 材料与方法 | 第96-99页 |
| ·材料 | 第96-97页 |
| ·稳定表达NSP2细胞系的构建 | 第97-98页 |
| ·带FLAG标签MAVS与不带标签NSP2真核表达质粒的构建 | 第98页 |
| ·免疫荧光试验 | 第98页 |
| ·免疫印迹试验 | 第98-99页 |
| ·双荧光报告基因试验 | 第99页 |
| ·荧光定量试验 | 第99页 |
| 2 结果 | 第99-111页 |
| ·稳定表达NSP2细胞的G418筛选 | 第99-100页 |
| ·POLY(I：C)刺激的最佳时间 | 第100-101页 |
| ·NSP2抑制由POLY(I：C)诱导的IFN-β启动子活性与mRNA水平 | 第101-102页 |
| ·NSP2抑制由MAVS诱导的IFN-β启动子活性与mRNA水平 | 第102-105页 |
| ·NSP2抑制由PLSm14A诱导的IFN-β启动子活性与mRNA水平 | 第105-106页 |
| ·NSP2不影响IRF3进入细胞核 | 第106-108页 |
| ·NSP2不影响NF-κB进入细胞核 | 第108-110页 |
| ·NSP2与MAVS,PLSm14A的共定位 | 第110-111页 |
| 3 讨论 | 第111-113页 |
| 结论 | 第113-114页 |
| 创新点 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-126页 |
| 缩略词表 | 第126-127页 |
| 作者简介 | 第127-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
