| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-20页 |
| ·木质纤维素生物质结构特征 | 第13-15页 |
| ·木质纤维素乙醇的生产—方法与挑战 | 第15-17页 |
| ·木质纤维素乙醇的生产方法 | 第15-16页 |
| ·木质纤维素乙醇生产面临的挑战 | 第16-17页 |
| ·从环境基因组中开发酶资源—进展与问题 | 第17-19页 |
| ·从环境基因组中筛选糖苷水解酶的进展 | 第17-18页 |
| ·潜在问题 | 第18-19页 |
| ·论文的立题依据与工作思路 | 第19-20页 |
| 第二章 环境基因组内切酶的异源表达及密码子使用偏好性分析 | 第20-35页 |
| ·材料 | 第20-22页 |
| ·菌株、质粒和培养基 | 第20-21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·主要软件 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-24页 |
| ·糖苷水解酶基因克隆 | 第22-23页 |
| ·引物设计和PCR扩增程序 | 第22-23页 |
| ·基因片段的回收和连接 | 第23页 |
| ·大肠杆菌转化及重组质粒筛选 | 第23页 |
| ·糖苷水解酶的异源大量表达 | 第23-24页 |
| ·大肠杆菌表达菌株Rossetta的转化 | 第23-24页 |
| ·蛋白的诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第24页 |
| ·密码子优化分析 | 第24页 |
| ·大肠杆菌B strain密码子使用频率和各氨基酸使用频率的查找 | 第24页 |
| ·待测基因序列中密码子使用频率和各氨基酸使用频率查找 | 第24页 |
| ·结果与分析 | 第24-34页 |
| ·环境基因组来源内切酶基因初始序列的异源表达 | 第24-28页 |
| ·Umcel5c2在大肠杆菌中的表达 | 第25-26页 |
| ·Umcel5e1在大肠杆菌中的表达 | 第26-28页 |
| ·糖苷水解酶的密码子使用偏好性分析、密码子优化及优化后蛋白表达 | 第28-34页 |
| ·异源蛋白的密码子使用偏好性分析 | 第28-32页 |
| ·密码子优化及优化后蛋白的异源表达 | 第32-34页 |
| ·本章小结 | 第34-35页 |
| 第三章 环境基因组来源糖苷水解酶的纯化及酶学性质初步分析 | 第35-44页 |
| ·材料方法 | 第35页 |
| ·菌株、质粒和培养基 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-38页 |
| ·粗酶液的制备及SDS-PAGE检测 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白的纯化和保存 | 第36页 |
| ·内切酶酶学性质的初步分析 | 第36-37页 |
| ·最适温度的测定 | 第36页 |
| ·最适pH值的测定 | 第36-37页 |
| ·内切酶酶活测定 | 第37页 |
| ·野生型Umcel5c2动力学参数的测定 | 第37-38页 |
| ·Umcel5c2酶促反应动力学类型的确定 | 第37页 |
| ·Umcel5c2酶动力学参数的测定 | 第37-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-43页 |
| ·糖苷水解酶的表达纯化 | 第38-39页 |
| ·Umcel5e1可溶性蛋白的表达 | 第38页 |
| ·Umcel5c2的表达纯化 | 第38-39页 |
| ·糖苷水解酶酶学性质的初步分析 | 第39-41页 |
| ·Umcel5c2最适温度的测定 | 第39-40页 |
| ·Umcel5c2催化底物范围与酶活力测定 | 第40页 |
| ·Umcle5c2催化底物范围与酶活力测定 | 第40-41页 |
| ·野生型Umcel5c2动力学参数性质测定 | 第41-43页 |
| ·Umcel5c2酶促反应动力学类型的确定 | 第41页 |
| ·Umcel5c2酶动力学参数的测定 | 第41-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 第四章 第五家族木葡聚糖酶Umcel5c2底物催化特异性的研究 | 第44-60页 |
| ·材料方法 | 第44-46页 |
| ·菌株、质粒 | 第44-45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| ·主要软件 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-48页 |
| ·Umcel5c2同源模建比对 | 第46页 |
| ·Umcel5c2缺失突变株的构建 | 第46-47页 |
| ·基因亚克隆和PCR扩增程序 | 第46-47页 |
| ·DNA片段的回收和连接 | 第47页 |
| ·转化和重组质粒的筛选 | 第47页 |
| ·突变株的表达纯化 | 第47-48页 |
| ·粗酶液的制备 | 第47页 |
| ·突变株的纯化 | 第47-48页 |
| ·突变株动力学参数的测定 | 第48页 |
| ·结果与分析 | 第48-58页 |
| ·Umcel5c2同源模建比对 | 第48-50页 |
| ·野生型Umcel5c2底物特异性影响因素分析 | 第50-54页 |
| ·缺失突变株的构建及动力学参数的确定 | 第54-58页 |
| ·缺失突变株的构建 | 第54-55页 |
| ·突变株的表达纯化 | 第55-56页 |
| ·突变株动力学参数的测定 | 第56-58页 |
| ·本章小结与讨论 | 第58-60页 |
| 全文总结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 致谢 | 第67-69页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第69页 |
