| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-25页 |
| 1.1 结核病及其现状 | 第11-13页 |
| 1.1.1 结核病 | 第11页 |
| 1.1.2 结核病的现状 | 第11-13页 |
| 1.2 结核分枝杆菌 | 第13-15页 |
| 1.2.1 结核分枝杆菌简介 | 第13-14页 |
| 1.2.2 结核分枝杆菌的致病性机制 | 第14-15页 |
| 1.3 CRISPR系统 | 第15-20页 |
| 1.3.1 CRISPR系统的结构 | 第15-16页 |
| 1.3.2 CRISPR系统的类型 | 第16-17页 |
| 1.3.3 CRISPR系统的作用机制 | 第17-19页 |
| 1.3.4 CRISPR系统与病原菌毒力的关系 | 第19页 |
| 1.3.5 结核分枝杆菌CRISPR系统研究现状 | 第19-20页 |
| 1.4 CRISPR/Cas6系统中Cas6蛋白简介 | 第20-22页 |
| 1.5 结核分枝杆菌与巨噬细胞 | 第22-23页 |
| 1.6 本课题研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-29页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第25页 |
| 2.1.2 试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.3 培养基及相关溶液配制 | 第26-27页 |
| 2.1.4 引物 | 第27-28页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-43页 |
| 2.2.1 Cas6蛋白生物信息学分析 | 第29页 |
| 2.2.2 重组载体构建 | 第29-32页 |
| 2.2.3 重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达、纯化 | 第32-36页 |
| 2.2.4 Cas6蛋白诱导THP-1巨噬细胞凋亡 | 第36-37页 |
| 2.2.5 Cas6蛋白在巨噬细胞中的定位 | 第37-38页 |
| 2.2.6 Cas6蛋白与巨噬细胞内蛋白的相互作用 | 第38-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-77页 |
| 3.1 Cas6-MBP表达载体的构建 | 第43-49页 |
| 3.1.1 Cas6蛋白生物信息学分析 | 第43-46页 |
| 3.1.2 重组蛋白载体的构建 | 第46-49页 |
| 3.2 Cas6-MBP融合蛋白的表达、纯化与验证 | 第49-52页 |
| 3.2.1 镍柱亲和层析 | 第49-50页 |
| 3.2.2 分子筛凝胶过滤层析 | 第50页 |
| 3.2.3 Cas6-MBP蛋白的验证(His标签抗体) | 第50-51页 |
| 3.2.4 BCA法测Cas6-MBP蛋白浓度 | 第51-52页 |
| 3.3 Cas6蛋白诱导巨噬细胞凋亡 | 第52-58页 |
| 3.3.1 Cas6蛋白为分泌蛋白 | 第52-53页 |
| 3.3.2 Cas6-MBP融合蛋白诱导THP-1巨噬细胞凋亡 | 第53-55页 |
| 3.3.3 MBP标签蛋白对THP-1巨噬细胞凋亡的影响 | 第55-58页 |
| 3.4 Cas6蛋白在巨噬细胞中的定位 | 第58-62页 |
| 3.4.1 载体的构建 | 第58-61页 |
| 3.4.2 Cas6蛋白在巨噬细胞中的定位 | 第61-62页 |
| 3.5 探究Cas6蛋白与THP-1细胞内蛋白的相互作用 | 第62-73页 |
| 3.5.1 THP-1巨噬细胞膜蛋白的提取、质谱验证及分析 | 第62-65页 |
| 3.5.2 THP-1巨噬细胞质蛋白的提取、质谱验证及分析 | 第65-67页 |
| 3.5.3 探究Cas6-MBP蛋白与THP-1巨噬细胞膜蛋白之间的相互作用 | 第67-68页 |
| 3.5.4 探究Cas6-MBP蛋白与THP-1巨噬细胞质蛋白之间的相互作用 | 第68-72页 |
| 3.5.5 探究MBP标签蛋白与THP-1巨噬细胞质蛋白之间相互作用 | 第72-73页 |
| 3.6 Cas6蛋白诱导THP-1巨噬细胞凋亡通路预测 | 第73-77页 |
| 4 讨论 | 第77-79页 |
| 5 结论 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 附录A 细胞膜蛋白质谱肽段比对结果 | 第86-89页 |
| 附录B 细胞质蛋白质谱肽段比对结果 | 第89-104页 |
| 攻读学位期间的学术论文与研究成果 | 第104-105页 |
| 致谢 | 第105页 |
