| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-17页 |
| 縮略词表 | 第17-18页 |
| 第一章 引言 | 第18-36页 |
| ·研究背景 | 第18-21页 |
| ·研究内容和意义 | 第21-22页 |
| ·文献综述一转录因子GATA4和GATA6在心血管系统中作用的研究进展 | 第22-29页 |
| ·GATA4和GATA6蛋白的结构特征 | 第22-23页 |
| ·心脏中GATA4和GATA6的靶基因 | 第23-24页 |
| ·心脏中与GATA4和GATA6相互作用的辅助因子 | 第24-25页 |
| ·GATA4在心脏发育及其疾病中的作用 | 第25-26页 |
| ·GATA6在心脏发育及其疾病中的作用 | 第26-27页 |
| ·GATA4、GATA6与miRNAs | 第27页 |
| ·结语 | 第27-29页 |
| ·文献综述二miRNAs在心脏发育及其疾病中的调控作用 | 第29-36页 |
| ·miRNAs概述 | 第29-30页 |
| ·心肌特异性miRNAs的表达调控 | 第30-31页 |
| ·miRNAs调控正常的心脏发育 | 第31页 |
| ·miRNAs与心脏疾病的关系 | 第31-34页 |
| ·miR-200家族研究进展 | 第34-35页 |
| ·展望 | 第35-36页 |
| 第二章 转录因子GATA6招募PPARa协同激活Glut4基因的表达 | 第36-70页 |
| ·前言 | 第36-37页 |
| ·材料与方法 | 第37-55页 |
| ·实验材料 | 第37-40页 |
| ·重组质粒的构建 | 第40-45页 |
| ·磷酸钙转染与荧光素酶活性测定 | 第45-46页 |
| ·新生SD大鼠原代心肌细胞和心脏成纤维细胞的分离与培养 | 第46-47页 |
| ·动物实验 | 第47页 |
| ·RNA提取与反转录 | 第47-48页 |
| ·免疫共沉淀(CoIP)与Western Blot | 第48-50页 |
| ·GST pull-down | 第50-52页 |
| ·蛋白质的原核表达与纯化 | 第50-51页 |
| ·体外转录与翻译 | 第51页 |
| ·GST pull-down | 第51-52页 |
| ·染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第52-53页 |
| ·Q-PCR | 第53-54页 |
| ·柠檬酸合酶活性测定 | 第54-55页 |
| ·细胞线粒体的提取 | 第54页 |
| ·细胞线粒体柠檬酸合酶活性的检测 | 第54-55页 |
| ·葡萄糖消耗实验 | 第55页 |
| ·统计学分析 | 第55页 |
| ·结果 | 第55-67页 |
| ·PPARα及其激动剂fenofibrate均能激活Glut4基因的表达 | 第55-57页 |
| ·PPARα被招募到Glut 4启动子的GATA位点而激活其转录 | 第57-59页 |
| ·GATA6与PPARα在细胞内相互作用 | 第59-60页 |
| ·GATA6增强PPARα诱导的Glut4转录 | 第60-61页 |
| ·介导PPARα与GATA6相互作用的结构域 | 第61-63页 |
| ·PPARα与GATA6不同结构域间的相互作用对Glut4启动子活性的影响 | 第63-64页 |
| ·PPRE位点足以维持PPARα与GATA6之间的协同作用 | 第64页 |
| ·PPARα mut1和GATA6 mut5两个缺失体都不能维持对Glut4启动子的协同激活作用 | 第64-66页 |
| ·PPARα和GATA6对葡萄糖转运及柠檬酸合酶活性的影响 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| ·小结 | 第69-70页 |
| 第三章 fenofibrate和Dox对小鼠NADH氧化酶及柠檬酸脱氢酶活性的影响 | 第70-78页 |
| ·前言 | 第70-71页 |
| ·材料与方法 | 第71-73页 |
| ·实验材料 | 第71页 |
| ·动物分组与处理方案 | 第71-72页 |
| ·组织线粒体的提取 | 第72页 |
| ·组织线粒体柠檬酸合酶活性的测定 | 第72-73页 |
| ·NADH氧化酶活性的测定 | 第73页 |
| ·统计学分析 | 第73页 |
| ·结果 | 第73-75页 |
| ·Dox和/或fenofibrate对线粒体柠檬酸合酶活性的影响 | 第73-74页 |
| ·Dox和/或fenofibrate对线粒体NADH氧化酶活性的影响 | 第74-75页 |
| ·讨论 | 第75-77页 |
| ·小结 | 第77-78页 |
| 第四章 miR-200b靶向GATA4对细胞增殖、周期和凋亡的调控 | 第78-103页 |
| ·前言 | 第78-79页 |
| ·材料方法 | 第79-86页 |
| ·实验材料 | 第79-80页 |
| ·重组质粒的构建 | 第80-81页 |
| ·细胞培养与转染 | 第81-82页 |
| ·miR-200b mimic/inhibitor和mimic/inhibitor NC的转染 | 第82页 |
| ·稳定转染建立GATA4过表达或knockdown及miR-200b过表达细胞系 | 第82页 |
| ·荧光素酶实验 | 第82-83页 |
| ·Western Blot | 第83页 |
| ·细胞增殖实验 | 第83页 |
| ·流式细胞学 | 第83-84页 |
| ·DAPI染色 | 第84页 |
| ·RT-qPCR检测miR-200b及GATA4 mRNA的表达 | 第84-86页 |
| ·统计学分析 | 第86页 |
| ·结果 | 第86-100页 |
| ·利用生物信息学软件预测靶向GATA4的miRNA | 第86-87页 |
| ·miR-200b及GATA4对细胞增殖的影响 | 第87-90页 |
| ·GATA4和miR-200b对细胞周期的影响 | 第90-93页 |
| ·GATA4及miR-200b对细胞核形态的影响 | 第93-95页 |
| ·miR-200b与GATA4 3’-UTR结合 | 第95-98页 |
| ·miR-200b对GATA4蛋白及mRNA表达水平的影响 | 第98-100页 |
| ·讨论 | 第100-101页 |
| ·小结 | 第101-103页 |
| 第五章 结论和创新点 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-114页 |
| 个人简历及在学期间发表的学术论文 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
