| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 第1章 综述与导言 | 第9-25页 |
| ·水产养殖现状 | 第9页 |
| ·减毒疫苗开发对防治养殖型病原菌感染的重要意义 | 第9-10页 |
| ·迟钝爱德华氏菌介绍 | 第10-12页 |
| ·分类命名 | 第10页 |
| ·生物学特性 | 第10-11页 |
| ·迟钝爱德华氏菌的感染 | 第11-12页 |
| ·微生物学检验 | 第12页 |
| ·爱德华氏菌致病机理的研究概况 | 第12-17页 |
| ·相关实验技术 | 第17-22页 |
| ·RNA逆转录 | 第17-19页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第19-21页 |
| ·自杀质粒敲除系统 | 第21-22页 |
| ·课题研究背景 | 第22-23页 |
| ·工作目标 | 第23-25页 |
| 第2章 材料与方法 | 第25-37页 |
| ·材料与仪器 | 第25-30页 |
| ·化学药品与生物试剂 | 第25-26页 |
| ·细菌培养基 | 第26页 |
| ·缓冲液 | 第26-27页 |
| ·实验仪器与设备 | 第27-29页 |
| ·菌种 | 第29页 |
| ·载体质粒 | 第29页 |
| ·重组质粒 | 第29页 |
| ·实验用到的引物 | 第29-30页 |
| ·微生物学方法 | 第30页 |
| ·细菌培养条件 | 第30页 |
| ·菌种的保藏 | 第30页 |
| ·遗传学方法 | 第30-32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第31页 |
| ·迟钝爱德华氏菌电转感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·迟钝爱德华氏菌迟钝爱德华氏菌电击转化 | 第31-32页 |
| ·分子生物学方法 | 第32-36页 |
| ·大肠杆菌中质粒DNA的抽提 | 第32-33页 |
| ·DNA的酶切 | 第33页 |
| ·DNA的连接 | 第33页 |
| ·DNA的沉淀 | 第33-34页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第34页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶回收 | 第34-35页 |
| ·细菌中的总RNA提取 | 第35页 |
| ·RNA纯度检测—分光光度计法 | 第35-36页 |
| ·RNA的逆转录 | 第36页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第36页 |
| ·实验过程中使用的生物学软件 | 第36-37页 |
| 第3章 结果与分析 | 第37-66页 |
| ·通过构建rpoE过量表达株对转录机器进行扰动 | 第37-50页 |
| ·巨型质粒与E.tarda毒力之间的关系不明显 | 第37-39页 |
| ·rpoE过量表达株的构建 | 第39-42页 |
| ·实时荧光定量PCR分析过量表达株的相对表达量 | 第42-43页 |
| ·对模式生物斑马鱼的感染及半数致死剂量(LD_(50))的测定 | 第43-44页 |
| ·压力耐受性实验 | 第44-49页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第49-50页 |
| ·通过软件预测σ~E识别调控的相关基因 | 第50-55页 |
| ·迟钝爱德华氏菌EIB202 σ~E识别的启动子序列查找 | 第50-51页 |
| ·启动子区域的sequence logos | 第51-52页 |
| ·σ~E调控基因计算机分析预测 | 第52-55页 |
| ·迟钝爱德华氏菌rpoE基因的敲除 | 第55-66页 |
| ·rpoE自杀灭活质粒pRE112-△rpoE的构建 | 第55-59页 |
| ·pRE112-derpoE转化SM10λpir并酶切鉴定 | 第59-61页 |
| ·利用自杀灭活质粒pRE112-△rpoE敲除染色体上的rpoE | 第61-66页 |
| 第4章 讨论 | 第66-67页 |
| 第5章 结论及展望 | 第67-69页 |
| ·主要结论 | 第67页 |
| ·展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
