| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-32页 |
| ·青霉素类抗生素 | 第17-18页 |
| ·基本结构 | 第17页 |
| ·抑菌机理 | 第17-18页 |
| ·青霉素类抗生素的市场 | 第18页 |
| ·半合成类抗生素 | 第18-19页 |
| ·6-氨基青霉烷酸 | 第19-20页 |
| ·概述 | 第19页 |
| ·6-APA的合成 | 第19-20页 |
| ·青霉素酰化酶 | 第20-25页 |
| ·青霉素酰化酶的分类 | 第21页 |
| ·青霉素G酰化酶的来源及结构 | 第21-22页 |
| ·青霉素G酰化酶的表达 | 第22-23页 |
| ·青霉素G酰化酶的研究进展 | 第23-25页 |
| ·在大肠杆菌中高效可溶性表达外源蛋白的策略 | 第25-29页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第25页 |
| ·大肠杆菌表达载体的构成 | 第25-27页 |
| ·大肠杆菌组成型表达系统 | 第27页 |
| ·重组菌的高密度培养 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌的培养与诱导方法 | 第28-29页 |
| ·固定化金属螯和层析(IMAC) | 第29-30页 |
| ·基本原理 | 第29页 |
| ·金属螯合载体的构成 | 第29-30页 |
| ·IMAC的应用 | 第30页 |
| ·论文的目的和意义 | 第30-31页 |
| ·论文的目的 | 第30页 |
| ·论文的创新点 | 第30-31页 |
| ·论文的研究内容 | 第31-32页 |
| 第二章 材料与方法 | 第32-42页 |
| ·本章引论 | 第32页 |
| ·材料 | 第32-35页 |
| ·菌种和质粒 | 第32-33页 |
| ·仪器、试剂盒、工具酶、化学试剂 | 第33-34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·抗生素、诱导剂 | 第34-35页 |
| ·缓冲液 | 第35页 |
| ·分子生物学于生物化学操作方法 | 第35页 |
| ·菌种培养与保存 | 第35-36页 |
| ·细胞破碎方法 | 第36页 |
| ·葡萄糖浓度测定方法 | 第36-38页 |
| ·青霉素G酰化酶活力测定 | 第38-42页 |
| ·比色分析法 | 第38-40页 |
| ·高效毛细管电泳分析方法 | 第40-42页 |
| 第三章 重组青霉素G酰化酶的组成型表达 | 第42-58页 |
| ·本章引论 | 第42页 |
| ·材料和方法 | 第42-43页 |
| ·质粒与菌株 | 第43页 |
| ·工具酶与试剂盒 | 第43页 |
| ·启动子的选择 | 第43页 |
| ·青霉素G酰化酶组成型表达质粒的构建 | 第43-54页 |
| ·构建思路 | 第44-46页 |
| ·PCR扩增tac启动子、pga基因以及TacPGA大片段 | 第46-50页 |
| ·双酶切反应 | 第50-51页 |
| ·连接与转化 | 第51-52页 |
| ·质粒快速鉴定筛选重组菌株 | 第52页 |
| ·重组菌的酶活筛选 | 第52-54页 |
| ·三种启动子对PGA表达的影响 | 第54-56页 |
| ·宿主的更换 | 第56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| 第四章 重组菌株TFpGTacPGA培养条件的优化与发酵罐培养 | 第58-72页 |
| ·本章引言 | 第58页 |
| ·材料与方法 | 第58-60页 |
| ·培养基与化学试剂 | 第58页 |
| ·培养条件 | 第58-59页 |
| ·分析方法 | 第59-60页 |
| ·培养条件的优化 | 第60-63页 |
| ·温度的优化 | 第60-61页 |
| ·摇瓶培养中装液量的优化 | 第61-62页 |
| ·培养基初始pH的优化 | 第62-63页 |
| ·培养基组成的优化 | 第63-67页 |
| ·酵母粉浓度优化 | 第63页 |
| ·初始葡萄糖浓度的优化 | 第63-65页 |
| ·玉米浆在摇瓶培养中的应用 | 第65-66页 |
| ·无机氮源的优化 | 第66-67页 |
| ·青霉素G酰化酶重组菌发酵的过程分析 | 第67-68页 |
| ·重组菌株TFpGTacPGA的发酵罐培养 | 第68-70页 |
| ·本章小节 | 第70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| 第五章 一步纯化、固定化青霉素G酰化酶的初步研究 | 第72-88页 |
| ·本章引论 | 第72页 |
| ·材料和方法 | 第72-73页 |
| ·质粒与菌株 | 第72-73页 |
| ·工具酶与试剂盒 | 第73页 |
| ·培养基 | 第73页 |
| ·载体 | 第73页 |
| ·固定化研究所用重组质粒的构建 | 第73-83页 |
| ·构建思路 | 第73-76页 |
| ·PCR扩增P-Tag293片段 | 第76-78页 |
| ·单酶切反应 | 第78-79页 |
| ·连接与转化 | 第79-80页 |
| ·转化子的筛选 | 第80-82页 |
| ·更换宿主 | 第82-83页 |
| ·固定化酶催化批次研究 | 第83-86页 |
| ·实验装置 | 第83页 |
| ·固定化酶制备过程 | 第83-84页 |
| ·青霉素G酰化酶的纯化 | 第84页 |
| ·固定化酶的酶活测定 | 第84-85页 |
| ·固定化酶的催化批次 | 第85-86页 |
| ·本章小节 | 第86-87页 |
| ·讨论 | 第87-88页 |
| 结论 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-94页 |
| 附录 | 第94-104页 |
| 附录1 实验仪器 | 第94-95页 |
| 附录2 化学试剂药品 | 第95-96页 |
| 附录3 Overlap PCR实验原理及方法 | 第96-97页 |
| 附录4 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第97-98页 |
| 附录5 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第98-100页 |
| 附录6 线性化载体的去磷酸化 | 第100-101页 |
| 附录7 感受态细胞的制备及质粒(连接产物)转化 | 第101-102页 |
| 附录8 菌落PCR | 第102-103页 |
| 附录9 质粒快速鉴定法筛选重组菌株 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第105-106页 |
| 作者和导师简介 | 第106-107页 |
| 附件 | 第107-108页 |