| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-31页 |
| 1 CAV 研究进展 | 第15-20页 |
| ·CAV 的基本特征及分类地位 | 第15-16页 |
| ·CAV 的基因组结构 | 第16-17页 |
| ·CAV 基因组的复制和转录方式 | 第17页 |
| ·CAV 基因组的复制 | 第17页 |
| ·CAV 基因组的转录 | 第17页 |
| ·CAV 基因组编码蛋白及功能研究进展 | 第17-20页 |
| ·VP1 蛋白 | 第18页 |
| ·VP2 蛋白 | 第18-19页 |
| ·VP3 蛋白 | 第19-20页 |
| 2 CIA 诊断方法及疫苗研究进展 | 第20-23页 |
| ·CIA 诊断方法及疫苗研究进展 | 第20-21页 |
| ·血清学检测 | 第20-21页 |
| ·分子生物学方法 | 第21页 |
| ·CIA 疫苗研究进展 | 第21-23页 |
| ·传统疫苗 | 第21-22页 |
| ·基因工程疫苗 | 第22-23页 |
| 3 巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 | 第23-30页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的生物学特性 | 第23-24页 |
| ·外源蛋白的表达 | 第24-29页 |
| ·宿主菌 | 第24页 |
| ·表达载体与载体的整合 | 第24-26页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的优点 | 第26-27页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的胞内表达与分泌表达 | 第27页 |
| ·影响外源蛋白表达的因素 | 第27-29页 |
| ·毕赤酵母表达系统在动物传染病领域中的应用进展 | 第29-30页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第30-31页 |
| 第二章 CAV VP1、VP2 基因在巴斯德毕赤酵母中的表达 | 第31-42页 |
| 1 材料与方法 | 第32-35页 |
| ·毒株、质粒、菌株、细胞 | 第32页 |
| ·主要试剂与药品 | 第32页 |
| ·仪器设备 | 第32页 |
| ·CAV VP1 基因及CAV VP2 基因的克隆与表达 | 第32-35页 |
| ·VP1、 VP2 基因引物设计 | 第32-33页 |
| ·VP1、VP2 基因各片段的获得 | 第33页 |
| ·表达载体的构建 | 第33页 |
| ·重组表达质粒的酶切鉴定 | 第33页 |
| ·酵母细胞的转化 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的真核表达 | 第34页 |
| ·重组酵母菌株的PCR 筛选 | 第34页 |
| ·重组蛋白的Dot-ELISA 检测 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白的免疫印迹试验 | 第35页 |
| ·CAV VP1 重组蛋白和CAV VP2 重组蛋白免疫活性的检测 | 第35页 |
| ·免疫动物 | 第35页 |
| ·酶联免疫吸附试验（ELISA） | 第35页 |
| ·间接免疫荧光检测（Immunofluorence assay IFA） | 第35页 |
| 2 结果 | 第35-40页 |
| ·CAV VP1、CAV VP2 基因的扩增 | 第35-36页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组表达质粒的酶切鉴定 | 第36页 |
| ·重组表达质粒的序列测定与分析 | 第36-37页 |
| ·重组酵母菌株的PCR 筛选 | 第37页 |
| ·重组表达质粒的转化与鉴定 | 第37-40页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第37-38页 |
| ·表达产物的Western blot 分析 | 第38-39页 |
| ·表达产物的Dot-ELISA 分析 | 第39页 |
| ·酶联免疫吸附试验（ELISA） | 第39页 |
| ·间接免疫荧光检测（Immunofluorence assay IFA） | 第39-40页 |
| 3 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 CAV VP1、VP2 基因在巴斯德毕赤酵母中表达条件的优化 | 第42-52页 |
| 1 材料与方法 | 第42-45页 |
| ·菌株 | 第42页 |
| ·主要溶液的配制 | 第42-43页 |
| ·仪器设备 | 第43-44页 |
| ·发酵条件的优化 | 第44-45页 |
| ·表达生长曲线的测定 | 第44页 |
| ·甲醇补料方式的影响试验 | 第44页 |
| ·溶氧的影响 | 第44-45页 |
| ·pH 的影响 | 第45页 |
| ·发酵产物不同温度的保存试验 | 第45页 |
| 2 结果 | 第45-50页 |
| ·发酵条件的优化 | 第45-50页 |
| ·补料方式对发酵产物的影响 | 第45-46页 |
| ·溶氧对发酵产物的影响 | 第46-47页 |
| ·pH 对发酵产物的影响 | 第47-48页 |
| ·发酵产物表达生长曲线 | 第48-49页 |
| ·发酵产物不同温度的保存结果 | 第49-50页 |
| 3. 讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 CAV VP1、VP2 基因在巴斯德毕赤酵母中表达产物免疫学特性的初步研究 | 第52-63页 |
| 1 材料与方法 | 第52-54页 |
| ·菌株 | 第52页 |
| ·血清 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52-53页 |
| ·主要仪器 | 第53页 |
| ·重组蛋白的制备 | 第53页 |
| ·动物免疫 | 第53页 |
| ·SPF 雏鸡的免疫试验 | 第53页 |
| ·非免疫种鸡的免疫试验 | 第53页 |
| ·SPF 雏鸡血清的间接免疫荧光检测(IFA) | 第53-54页 |
| ·SPF 雏鸡血清的酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第54页 |
| ·种鸡血清及卵黄的酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第54页 |
| ·雏鸡肝脏的 PCR 检测 | 第54页 |
| ·雏鸡的病理学检测 | 第54页 |
| 2 结果 | 第54-61页 |
| ·CAV VP1 重组蛋白和CAV VP2 重组蛋白的免疫效果试验 | 第54-61页 |
| ·SPF 雏鸡血清的酶联免疫吸附试验 | 第54-56页 |
| ·SPF 雏鸡血清的间接免疫荧光检测 | 第56-57页 |
| ·种鸡血清及卵黄的酶联免疫吸附实验(ELISA) | 第57-59页 |
| ·攻毒后雏鸡体重 | 第59-60页 |
| ·PCR 检测 | 第60页 |
| ·病理学检测 | 第60-61页 |
| 3 讨论 | 第61-63页 |
| 第五章 结 论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简历 | 第71页 |
