| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 主要性状的中英文对照和英文缩写 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-29页 |
| 1 前言 | 第14页 |
| 2 排卵过程研究进展 | 第14-17页 |
| ·排卵过程的生物化学机制 | 第15-16页 |
| ·排卵过程的分子机制 | 第16-17页 |
| ·COC扩张 | 第16页 |
| ·孕酮受体 | 第16-17页 |
| 3 ADAMTS1研究进展 | 第17-21页 |
| ·ADAMTS1基因概况 | 第17页 |
| ·ADAMTS1的结构 | 第17-18页 |
| ·ADAMTS1基因的时空分布 | 第18-19页 |
| ·ADAMTS1基因的表达谱 | 第18页 |
| ·ADAMTS1基因被一些与炎症相关的因子所诱导 | 第18-19页 |
| ·ADAMTS1基因在排卵前期瞬时表达 | 第19页 |
| ·ADAMTS1基因的功能 | 第19-21页 |
| ·ADAMTS1的敲除 | 第19页 |
| ·PR基因与ADAMTS1基因的关系 | 第19-20页 |
| ·ADAMTS1的其他功能 | 第20-21页 |
| 4 基因定位研究进展 | 第21-22页 |
| 5 启动子研究进展 | 第22-26页 |
| ·启动子的特点 | 第23页 |
| ·启动子克隆方法 | 第23-24页 |
| ·生物信息学在启动子预测和分离中的应用 | 第24-25页 |
| ·启动子结构和功能的研究方法 | 第25-26页 |
| 6 定点突变原理与方法研究进展 | 第26-27页 |
| 7 电泳迁移率检测技术研究进展 | 第27-29页 |
| 第二章 猪ADAMTS1基因的分离、定位和遗传效应的研究 | 第29-53页 |
| 1 引言 | 第29页 |
| 2 试验材料 | 第29-32页 |
| ·DNA样品 | 第29页 |
| ·基因定位所用的猪辐射杂种克隆板(IMpRH) | 第29-30页 |
| ·主要仪器和设备 | 第30页 |
| ·主要试剂及溶液 | 第30-32页 |
| ·主要试剂 | 第30-31页 |
| ·主要溶液 | 第31-32页 |
| ·主要生物学软件 | 第32页 |
| 3 试验方法 | 第32-38页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| ·猪基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| ·基因组DNA浓度的测定和质量检测 | 第33页 |
| ·扩增猪ADAMTS1基因所用引物的设计与合成 | 第33页 |
| ·基因组扩增 | 第33-35页 |
| ·PCR产物回收、克隆、测序和生物信息学分析 | 第35-37页 |
| ·PCR产物的回收 | 第35页 |
| ·载体连接 | 第35页 |
| ·感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第35页 |
| ·连接产物的转化 | 第35-36页 |
| ·阳性克隆子鉴定及测序 | 第36-37页 |
| ·猪ADAMTS1基因染色体精细定位 | 第37-38页 |
| ·PCR扩增分型 | 第37页 |
| ·数据分析 | 第37-38页 |
| ·猪ADAMTSl蛋白质基本特征预测 | 第38页 |
| 4 结果与分析 | 第38-49页 |
| ·猪ADAMTS1基因的克隆 | 第38页 |
| ·猪ADAMTS1基因结构分析 | 第38-40页 |
| ·猪ADAMTS1基因的染色体精细定位 | 第40-44页 |
| ·猪ADAMTS1基因遗传效应分析 | 第44-49页 |
| ·猪ADAMTS1基因第7外显子PvuⅡ酶切位点遗传效应分析 | 第44-47页 |
| ·猪ADAMTS1基因第7内含子StyⅠ酶切位点遗传效应分析 | 第47-49页 |
| 5 讨论 | 第49-53页 |
| ·基于EST序列分离新基因的策略 | 第49-50页 |
| ·猪ADAMTS1基因组结构的分析 | 第50页 |
| ·猪ADAMTS1基因预测的蛋白结构域、功能位点的分析 | 第50页 |
| ·猪ADAMTS1基因的定位 | 第50-51页 |
| ·猪ADAMTS1基因的SNP研究 | 第51-52页 |
| ·猪ADAMTS1的遗传效应分析 | 第52-53页 |
| 第三章 猪ADAMTS1基因表达模式的研究 | 第53-62页 |
| 1 引言 | 第53页 |
| 2 试验材料 | 第53-54页 |
| ·试验样品 | 第53页 |
| ·猪组织样品 | 第53页 |
| ·主要仪器 | 第53页 |
| ·主要药品及试剂 | 第53-54页 |
| ·主要试剂 | 第53-54页 |
| ·主要溶液 | 第54页 |
| 3 试验方法 | 第54-56页 |
| ·试验组动物个体药物处理 | 第54页 |
| ·卵巢颗粒细胞的分离、培养 | 第54-55页 |
| ·猪组织和细胞样品RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第55-56页 |
| ·猪组织/细胞总RNA的提取 | 第55页 |
| ·RNA完整性的检测 | 第55页 |
| ·猪组织总RNA的RNase-free DNase-Ⅰ处理及纯化 | 第55-56页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第56页 |
| ·RT-PCR方法扩增cDNA | 第56页 |
| ·PCR反应体系 | 第56页 |
| ·RT-PCR反应产物的检测 | 第56页 |
| 4 结果与分析 | 第56-60页 |
| ·猪卵巢颗粒细胞的分离与培养 | 第56-57页 |
| ·猪组织/细胞总RNA的提取 | 第57-58页 |
| ·猪ADAMTS1转录水平组织表达谱 | 第58-59页 |
| ·猪ADAMTS1在猪卵巢颗粒细胞转录水平表达情况 | 第59-60页 |
| ·猪PR基因在猪卵巢颗粒细胞转录水平表达情况 | 第60页 |
| 5 讨论 | 第60-62页 |
| ·猪卵巢颗粒细胞的原代培养 | 第60-61页 |
| ·猪ADAMTS1基因在器官水平的表达模式 | 第61页 |
| ·猪ADAMTS1在猪卵巢颗粒细胞转录水平表达情况 | 第61页 |
| ·猪ADAMTS1基因和PR基因在猪卵巢颗粒细胞转录水平表达的联系 | 第61-62页 |
| 第四章 猪ADAMTS1基因启动子的研究 | 第62-91页 |
| 1 引言 | 第62页 |
| 2 试验材料 | 第62-66页 |
| ·试验动物 | 第62页 |
| ·质粒、菌株和细胞株 | 第62页 |
| ·主要药品及试剂 | 第62-64页 |
| ·常用试剂配方 | 第64页 |
| ·引物 | 第64-66页 |
| 3 试验方法 | 第66-77页 |
| ·基因组DNA的提取与纯化 | 第66页 |
| ·基因组步移库的构建 | 第66-68页 |
| ·基因组DNA的质量检测 | 第66-67页 |
| ·基因组DNA的消化 | 第67页 |
| ·DNA的纯化 | 第67页 |
| ·连接接头 | 第67-68页 |
| ·基因组PCR步移 | 第68-69页 |
| ·步移产物的回收和克隆 | 第69页 |
| ·外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第69页 |
| ·定点突变片段的获得 | 第69页 |
| ·质粒的小量制备(碱裂解法) | 第69-70页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法) | 第70-71页 |
| ·质粒DNA的定量 | 第71页 |
| ·重组质粒(阳性质粒)的鉴定 | 第71页 |
| ·细胞培养及传代 | 第71页 |
| ·细胞株的保藏 | 第71-72页 |
| ·冻存细胞的复苏 | 第72页 |
| ·脂质体转染法 | 第72页 |
| ·Western blot检测PR在卵巢颗粒细胞中的表达 | 第72-74页 |
| ·EMSA探针的生物素标记 | 第74-75页 |
| ·化学发光法EMSA | 第75-77页 |
| 4 结果 | 第77-87页 |
| ·猪ADAMTS1基因启动子的克隆及生物信息学分析 | 第77-83页 |
| ·基因组步移库的构建 | 第77页 |
| ·猪ADAMTS1基因启动子的获得 | 第77-79页 |
| ·生物信息学预测ADAMTS1启动子上转录因子结合位点 | 第79-80页 |
| ·猪ADAMTS1启动子功能分析 | 第80-83页 |
| ·猪孕酮受体基因DBD区域的克隆和表达质粒的构建 | 第83-84页 |
| ·猪PR与ADAMTS1的相互作用分析 | 第84-86页 |
| ·孕酮受体在卵巢颗粒细胞中的Western blot杂交鉴定 | 第86页 |
| ·EMSA结果 | 第86-87页 |
| 5 讨论 | 第87-91页 |
| ·ADAMTS1启动子的研究策略 | 第87-88页 |
| ·猪ADAMTS1基因启动子的克隆 | 第87页 |
| ·猪ADAMTS1基因启动子的生物信息学分析 | 第87-88页 |
| ·报告基因系统和转染系统 | 第88页 |
| ·猪ADAMTS1基因启动子结构和功能的分析 | 第88-89页 |
| ·EMSA技术在本研究中的运用 | 第89-90页 |
| ·ADAMTS1基因启动子上的其他元件 | 第90-91页 |
| 下一步的工作 | 第91-92页 |
| 小结 | 第92-94页 |
| 主要创新点 | 第94-95页 |
| 主要参考文献 | 第95-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 在读期间发表论文题录 | 第105-106页 |
| 附录:所获得猪ADAMTS1基因DNA序列 | 第106-110页 |
