刺苋花粉泛过敏原profilin基因的克隆与表达
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 一 前言 | 第8-15页 |
| 1. 研究背景 | 第8-10页 |
| 2. 国内外研究现状 | 第10-14页 |
| ·过敏原基因克隆的策略 | 第10-11页 |
| ·变应原蛋白质家族的分类 | 第11-14页 |
| 3. 本论文的研究内容和研究目标 | 第14-15页 |
| 二 技术路线 | 第15-16页 |
| 三 材料和方法 | 第16-32页 |
| 1. 主要仪器 | 第16-17页 |
| 2. 实验材料 | 第17-19页 |
| ·植物材料 | 第17页 |
| ·质粒和菌种 | 第17页 |
| ·引物合成 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17-18页 |
| ·其它主要试剂的配方 | 第18-19页 |
| 3. 实验方法 | 第19-32页 |
| ·引物序列的分析获得 | 第19-21页 |
| ·mRNA的提取 | 第21-22页 |
| ·琼脂糖凝胶甲醛变性电泳 | 第22页 |
| ·cDNA第一链合成反应 | 第22-23页 |
| ·RT-PCR扩增目的基因 | 第23-24页 |
| ·PCR产物的回收 | 第24-25页 |
| ·目的片段的TA克隆 | 第25-28页 |
| ·测序与分析 | 第28页 |
| ·表达载体的构建 | 第28-30页 |
| ·外源基因的诱导表达 | 第30-31页 |
| ·重组蛋白的分析预测 | 第31-32页 |
| 四 结果与分析 | 第32-45页 |
| 1. 基因克隆 | 第32-33页 |
| ·RNA的提取 | 第32页 |
| ·RT-PCR结果分析 | 第32-33页 |
| 2. 克隆基因鉴定 | 第33-36页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第33页 |
| ·测序与结果分析 | 第33-34页 |
| ·序列比对与进化分析 | 第34-36页 |
| 3. 构建表达载体 | 第36-40页 |
| ·质粒水平PCR引入酶切位点 | 第36-38页 |
| ·表达载体的选择与构建 | 第38-39页 |
| ·重组子的鉴定 | 第39-40页 |
| 4. 外源基因诱导表达 | 第40-41页 |
| 5. 生物信息学蛋白质分析预测 | 第41-45页 |
| ·蛋白质基本信息分析 | 第41-42页 |
| ·抗原性预测分析 | 第42-44页 |
| ·三维结构预测分析 | 第44-45页 |
| 五 讨论与展望 | 第45-47页 |
| 六 结论 | 第47-48页 |
| 七 附录 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 在学期间发表的文章 | 第55页 |
| 主要获奖情况 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
