胸膜肺炎放线杆菌萘啶酸抗性菌株的选育和信号标签突变株的构建
| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-33页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎及其危害 | 第12-18页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的流行病学 | 第12-17页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的流行现状 | 第12-15页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的发生和传播 | 第15-16页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的临床症状 | 第16-17页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的病理学变化 | 第17页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的危害 | 第17-18页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌(APP) | 第18-26页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的发现 | 第18页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的基本特征 | 第18-20页 |
| ·毒力相关因子 | 第20-26页 |
| ·溶血外毒素(Apx) | 第20-24页 |
| ·脂多糖(LPS) | 第24页 |
| ·荚膜多糖(CP) | 第24-25页 |
| ·转铁结合蛋白(TBP) | 第25-26页 |
| ·萘啶酸抗性相关基因 | 第26-30页 |
| ·化学结构及其与药效的关系 | 第26页 |
| ·抗菌谱 | 第26-27页 |
| ·抗菌机理 | 第27-28页 |
| ·耐药性的研究 | 第28-30页 |
| ·信号标签诱变(STM)技术 | 第30-33页 |
| ·STM技术的原理 | 第30-31页 |
| ·STM技术的应用 | 第31-33页 |
| 2 APP萘啶酸抗性菌株的选育及其相关基因的研究 | 第33-46页 |
| ·研究目的 | 第33页 |
| ·实验材料 | 第33-37页 |
| ·细菌菌株 | 第33页 |
| ·载体与质粒 | 第33-34页 |
| ·培养基及抗生素的配制 | 第34-35页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第35页 |
| ·酶及试剂盒 | 第35页 |
| ·质粒抽提与鉴定试剂 | 第35-36页 |
| ·其他试剂 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-41页 |
| ·细菌的复苏 | 第37页 |
| ·APP菌株萘啶酸抗性的诱导 | 第37页 |
| ·细菌基因组的提取 | 第37页 |
| ·gyrA基因片段的PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·PCR产物的电泳检测及回收 | 第38页 |
| ·PCR产物、载体的酶切及回收 | 第38-39页 |
| ·连接 | 第39页 |
| ·转化 | 第39-40页 |
| ·碱裂解法小量制备质粒DNA | 第40页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·gyrA基因片段的测序 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-45页 |
| ·萘啶酸抗性菌株的诱导 | 第41页 |
| ·APP菌株的PCR验证 | 第41-42页 |
| ·gyrA基因的PCR扩增 | 第42页 |
| ·重组质粒pB Ⅱ SK(+)-A的酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·DNA测序与序列BLAST分析 | 第43-44页 |
| ·gyrA基因片段编码的氨基酸序列比较 | 第44-45页 |
| ·结论 | 第45-46页 |
| 3 APP信号标签突变株的构建 | 第46-61页 |
| ·研究目的 | 第46-48页 |
| ·实验材料 | 第48-51页 |
| ·菌株与质粒 | 第48页 |
| ·培养基、抗生素的配制 | 第48-49页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第49页 |
| ·酶和试剂 | 第49-50页 |
| ·特异性标签 | 第50页 |
| ·其他试剂 | 第50-51页 |
| ·实验方法 | 第51-55页 |
| ·细菌的培养 | 第51页 |
| ·特异性标签在转座子内的克隆 | 第51页 |
| ·细菌接合实验(MATING) | 第51-52页 |
| ·三亲本接合 | 第51-52页 |
| ·两亲本接合 | 第52页 |
| ·突变株的筛选与鉴定 | 第52-53页 |
| ·突变株的抗性筛选 | 第52页 |
| ·突变株的PCR鉴定 | 第52-53页 |
| ·Southern Blot分析 | 第53-55页 |
| ·结果与分析 | 第55-59页 |
| ·三亲本接合与二亲本接合方法的比较 | 第55-56页 |
| ·不同APP菌株接合及转座效率的比较 | 第56-57页 |
| ·突变株的筛选与鉴定 | 第57-59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| ·关于接合转移试验方法 | 第59页 |
| ·关于STM突变株的构建 | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 4 结论与展望 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
