家蚕泛素基因的多态性与野蚕泛素基因的克隆及原核表达
| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 前言 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1 动物蛋白质的降解 | 第12-15页 |
| ·溶酶体途径 | 第12页 |
| ·胱天蛋白酶(caspase)水解途径 | 第12-13页 |
| ·泛素-蛋白水解酶复合体通路 | 第13-15页 |
| ·靶蛋白的多聚泛素化 | 第13-14页 |
| ·蛋白水解酶复合体降解蛋白质 | 第14-15页 |
| 2 泛素的发现、结构和分布 | 第15-18页 |
| ·Ub的发现 | 第15-16页 |
| ·Ub的结构 | 第16-17页 |
| ·Ub的分布及含量变化 | 第17-18页 |
| 3.泛素基因的种类 | 第18-19页 |
| 4 泛素系统及其功能研究 | 第19-22页 |
| ·泛素系统的作用机理 | 第19-20页 |
| ·泛素系统参与的生命过程 | 第20-22页 |
| ·泛素系统与MHCI类分子呈递的多肽 | 第20-21页 |
| ·内质网存留蛋白与泛素系统 | 第21-22页 |
| ·泛素系统与膜蛋白 | 第22页 |
| ·泛素系统的其他生物学功能 | 第22页 |
| 5 课题的研究目的及意义 | 第22-24页 |
| 第二章 家蚕泛素基因的多态性分析 | 第24-38页 |
| 1 材料与试剂 | 第24-26页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·碱性质粒抽提试剂 | 第25页 |
| ·核酸电泳的相关试剂 | 第25页 |
| ·常用缓冲夜和试剂 | 第25-26页 |
| ·其它试剂 | 第26页 |
| 2 实验方法 | 第26-29页 |
| ·种子序列的获得 | 第26页 |
| ·家蚕多聚泛素基因序列的获得 | 第26页 |
| ·特异引物设计与合成 | 第26-27页 |
| ·多聚泛素基因的验证 | 第27-29页 |
| ·野蚕DNA基因组的提取 | 第27页 |
| ·泛素基因的PCR扩增 | 第27页 |
| ·目的基因片段cDNA的回收 | 第27-28页 |
| ·目的片段与pMD18-T的连接反应 | 第28页 |
| ·大肠杆菌E.coliTG1感受态细胞制备 | 第28页 |
| ·连接产物的转化 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的筛选 | 第29页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-36页 |
| ·多聚泛素基因电子克隆 | 第29-30页 |
| ·家蚕泛素基因的多态性分析 | 第30-34页 |
| ·家蚕泛素蛋白氨基酸比对 | 第34页 |
| ·野蚕泛素基因的PCR扩增 | 第34-36页 |
| ·野蚕泛素基因的序列分析 | 第36页 |
| 4 讨论 | 第36-38页 |
| ·关于多聚泛素基因的扩增 | 第36-37页 |
| ·关于泛素基因的表达框 | 第37页 |
| ·关于多聚泛素基因的多态性 | 第37-38页 |
| 第三章 野蚕泛素基因的克隆及序列分析 | 第38-43页 |
| 1 实验材料 | 第38页 |
| 2 实验方法 | 第38-39页 |
| ·特异引物设计与合成 | 第38页 |
| ·野桑蚕体壁总RNA的提取 | 第38页 |
| ·第一链cDNA合成 | 第38-39页 |
| ·RT-PCR扩增目的片段 | 第39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-41页 |
| ·RT-PCR扩增与重组质粒酶切鉴定及测序 | 第39-40页 |
| ·野桑蚕泛素基因的编码区 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 野蚕泛素基因的原核表达 | 第43-51页 |
| 1 生物材料 | 第43页 |
| 2 实验试剂 | 第43-44页 |
| ·酶 | 第43页 |
| ·SDS-PAGE电泳相关试剂 | 第43-44页 |
| 3 实验方法 | 第44-47页 |
| ·融合基因表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·融合基因在大肠杆菌中进行表达 | 第45-46页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第46-47页 |
| 4 结果与分析 | 第47-49页 |
| ·融合基因表达载体的构建 | 第47页 |
| ·泛素蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第47-49页 |
| 5 讨论 | 第49-51页 |
| 全文小结 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 研究生在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第60-61页 |
| 附录1 家蚕(大造)编码多聚泛素的DNA序列 | 第61-62页 |
| 附录2 15个单体泛素基因及其编码框 | 第62-66页 |
| 附录3 野蚕泛素基因的登录号 | 第66-67页 |
| 附录4 DNA为模板的野蚕泛素基因测序图 | 第67-68页 |
| 附录5 cDNA为模板的野蚕泛素基因测序图 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 详细摘要 | 第70-72页 |
