| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第一章 综述 | 第12-28页 |
| 1 鳗弧菌的研究进展 | 第12-16页 |
| ·流行病学 | 第12页 |
| ·毒力因子及致病机制 | 第12-16页 |
| ·铁摄取 | 第12-13页 |
| ·铁摄取系统 | 第12-13页 |
| ·血红素转运和代谢系统 | 第13页 |
| ·运动力和趋化性 | 第13-14页 |
| ·胞外组分 | 第14-15页 |
| ·溶血素 | 第14页 |
| ·金属蛋白酶 | 第14页 |
| ·外膜孔道蛋白 | 第14-15页 |
| ·胞外多糖 | 第15页 |
| ·毒素 | 第15页 |
| ·内毒素 | 第15页 |
| ·外毒素 | 第15页 |
| ·分泌系统 | 第15-16页 |
| 2 细菌的信号转导系统 | 第16-21页 |
| ·分类 | 第16-21页 |
| ·单组分调控系统（OCRS） | 第17页 |
| ·双组分调控系统（TCRS） | 第17-20页 |
| ·三组分调控系统（ThCRS） | 第20-21页 |
| 3 Cpx 双组分调控系统 | 第21-27页 |
| ·Cpx 双组分调控系统简介 | 第21页 |
| ·Cpx 双组分系统参与的调控 | 第21-27页 |
| ·Cpx 系统的自我调控 | 第21-23页 |
| ·Cpx 系统的自体活化 | 第21-22页 |
| ·CpxP 对Cpx 系统的抑制 | 第22页 |
| ·CpxA 对CpxR 的正负双向调控 | 第22-23页 |
| ·CpxR 的旁路激活 | 第23页 |
| ·Cpx 调控膜结构蛋白的折叠和组装 | 第23-24页 |
| ·Cpx 系统对细菌生存和致病能力的影响 | 第24-27页 |
| ·碱性pH 压力调控 | 第24-25页 |
| ·耐药性 | 第25页 |
| ·Cpx 在不同细菌的毒力调控 | 第25-27页 |
| 4 研究目的及意义 | 第27-28页 |
| 第二章 鳗弧菌cpx 基因簇的克隆和生物信息学分析 | 第28-43页 |
| 1 材料和方法 | 第28-36页 |
| ·菌株和质粒 | 第28页 |
| ·培养条件 | 第28页 |
| ·鳗弧菌cpx 基因簇的克隆 | 第28-36页 |
| ·cpx 基因簇部分保守区的克隆 | 第28-32页 |
| ·引物设计 | 第28-29页 |
| ·鳗弧菌M3 基因组DNA 的制备 | 第29-30页 |
| ·PCR 扩增cpx 基因簇的保守区 | 第30页 |
| ·目的片段的克隆 | 第30-31页 |
| ·阳性重组子的鉴定及测序 | 第31-32页 |
| ·通过染色体步移获得cpx 基因簇全序列 | 第32-35页 |
| ·引物设计 | 第33页 |
| ·cpxR 上游未知序列的扩增 | 第33-35页 |
| ·cpxA 下游未知序列的扩增 | 第35页 |
| ·cpx 基因簇的序列拼接及验证 | 第35-36页 |
| 2 结果 | 第36-42页 |
| ·保守区引物扩增序列 | 第36-37页 |
| ·cpx 基因簇全序列的克隆 | 第37-42页 |
| 3 讨论 | 第42-43页 |
| 第三章 鳗弧菌cpxR 和cpxA 基因缺失突变株的构建 | 第43-53页 |
| 1 材料和方法 | 第43-51页 |
| ·菌株、质粒及引物 | 第43-44页 |
| ·试剂 | 第44页 |
| ·cpxR 基因缺失突变株的构建 | 第44-51页 |
| ·DcpxR-F1F2 片段的克隆 | 第45-47页 |
| ·DcpxR-F1 片段的扩增 | 第45-46页 |
| ·DcpxR-F2 片段的扩增 | 第46页 |
| ·Overlap PCR 获得DcpxR-F1F2 片段 | 第46-47页 |
| ·DcpxR-F1F2 片段的TA 克隆 | 第47页 |
| ·pREDcpxR 重组质粒的构建 | 第47-50页 |
| ·DcpxR-F1F2 和pRE112 的连接 | 第47-48页 |
| ·pREDcpxR 质粒转化至大肠杆菌MC1061 | 第48-50页 |
| ·pREDcpxR 质粒转化至大肠杆菌SM10 | 第50页 |
| ·接合及一次交换重组子的筛选 | 第50页 |
| ·二次交换及突变株的鉴定 | 第50-51页 |
| ·cpxA 基因缺失突变株的构建 | 第51页 |
| 2 结果 | 第51-52页 |
| ·cpxR 缺失突变株的鉴定 | 第51页 |
| ·cpxA 缺失突变株的鉴定 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-53页 |
| 第四章 鳗弧菌M3 cpxR 和cpxA 缺失突变株的表型分析 | 第53-68页 |
| 1 实验方法 | 第53-57页 |
| ·各种压力条件下细菌生长曲线测定 | 第53-54页 |
| ·正常条件培养 | 第53页 |
| ·碱性条件培养 | 第53页 |
| ·3.5% NaCl | 第53-54页 |
| ·细菌在H_20_2 和SDS 中的存活能力 | 第54页 |
| ·泳动能力 | 第54页 |
| ·菌膜形成能力测定 | 第54-55页 |
| ·明胶酶活力检测 | 第55页 |
| ·抗生素敏感实验 | 第55-56页 |
| ·毒力实验 | 第56-57页 |
| ·浸泡攻毒 | 第56-57页 |
| ·腹腔注射攻毒 | 第57页 |
| ·细菌在鱼体内的存活 | 第57页 |
| 2 结果 | 第57-65页 |
| ·不同培养条件下的生长曲线 | 第57-59页 |
| ·正常培养条件 | 第57-58页 |
| ·碱性培养条件 | 第58页 |
| ·3.596 NaCl | 第58-59页 |
| ·H_20_2 和SDS | 第59-60页 |
| ·泳动能力 | 第60页 |
| ·菌膜形成能力 | 第60-61页 |
| ·明胶酶活性 | 第61页 |
| ·抗生素敏感实验 | 第61-63页 |
| ·毒力实验 | 第63-65页 |
| ·浸泡攻毒 | 第63页 |
| ·肌肉注射攻毒 | 第63-64页 |
| ·体内存活实验 | 第64-65页 |
| 3 讨论 | 第65-68页 |
| 第五章 Cpx 系统对鳗弧菌致病相关基因表达的影响 | 第68-79页 |
| 1 材料与方法 | 第68-73页 |
| ·试剂 | 第68页 |
| ·qRT-PCR 引物 | 第68-69页 |
| ·cpx 基因簇在不同生长时期的转录水平 | 第69-73页 |
| ·细菌总RNA 的提取 | 第69-71页 |
| ·实验材料的预处理 | 第69-70页 |
| ·不同时期细菌样品的收集 | 第70页 |
| ·RNA 的提取 | 第70页 |
| ·RNA 样品质量检测 | 第70-71页 |
| ·残留基因组DNA 的去除 | 第71页 |
| ·RNA 的反转录 | 第71-72页 |
| ·cDNA 质量检测 | 第72页 |
| ·cpx 基因簇转录水平检测 | 第72-73页 |
| ·ΔcpxA 和ΔcpxR 中多种基因的转录水平 | 第73页 |
| 2 结果 | 第73-76页 |
| ·cpxR 和cpxA 基因在M3 不同生长时期的转录水平 | 第73页 |
| ·ΔcpxA 和ΔcpxR 中多种基因的转录水平 | 第73-76页 |
| 3 讨论 | 第76-79页 |
| 小结 | 第79-80页 |
| 附录Ⅰ | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-91页 |
| 发表文章 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
