| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-15页 |
| 缩略语 | 第15-16页 |
| 第一章 禽流感疫苗研究进展 | 第16-22页 |
| 引言 | 第16页 |
| 1 禽流感病毒简介 | 第16-17页 |
| 2 流感疫苗的类型 | 第17-18页 |
| ·全病毒疫苗 | 第17页 |
| ·裂解疫苗 | 第17页 |
| ·毒粒亚单位疫苗 | 第17-18页 |
| 3 禽流感疫苗研究进展 | 第18页 |
| 4 新型疫苗载体--昆虫杆状病毒载体 | 第18-20页 |
| 5 疫苗制备及检测技术介绍 | 第20-22页 |
| ·区带离心 | 第20-21页 |
| ·血凝试验 | 第21-22页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第22-24页 |
| 1 研究目的和意义 | 第22页 |
| 2 研究内容 | 第22-23页 |
| 3 实验基本流程 | 第23-24页 |
| ·重组杆状病毒的构建 | 第23页 |
| ·禽流感疫苗制备工艺 | 第23-24页 |
| 第三章 重组病毒的构建 | 第24-36页 |
| 1 材料与试剂 | 第24-25页 |
| ·材料 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24页 |
| ·主要试剂配制 | 第24-25页 |
| 2 实验方法 | 第25-31页 |
| ·细胞培养与冻存、复苏 | 第25-26页 |
| ·重组转移载体pFastBacHTb-gp64-HA 的构建 | 第26-27页 |
| ·重组Bacmid- gp64-HA 的构建 | 第27-30页 |
| ·重组Bacmid 通过脂质体介导法感染家蚕BmN 细胞 | 第30页 |
| ·重组病毒vBmgp64-HA PCR 鉴定 | 第30页 |
| ·重组蛋白gp64-HA 在家蚕BmN 细胞中的表达和鉴定 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-35页 |
| ·重组转移载体pFastBacHTb-gp64-HA 的鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组Bacmid- gp64-HA 的 PCR 鉴定 | 第32页 |
| ·重组病毒vBmgp64-HA 的PCR 鉴定 | 第32-33页 |
| ·HA 蛋白在在家蚕细胞中的表达与鉴定 | 第33-34页 |
| ·HA 蛋白在在家蚕细胞中的血凝活性鉴定 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-36页 |
| 第四章 逐级离心生产工艺 | 第36-44页 |
| 1 材料与试剂 | 第36-37页 |
| ·材料的获得 | 第36页 |
| ·试剂 | 第36页 |
| ·主要溶液配制 | 第36-37页 |
| ·实验设备 | 第37页 |
| 2 方法 | 第37-40页 |
| ·实验前准备工作 | 第37页 |
| ·匀浆 | 第37页 |
| ·低速离心 | 第37页 |
| ·高速离心 | 第37-38页 |
| ·超速离心 | 第38页 |
| ·区带离心 | 第38-39页 |
| ·超滤除糖 | 第39页 |
| ·样品活性检测 | 第39-40页 |
| ·样品蛋白浓度测定 | 第40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-42页 |
| ·工艺各个步骤样品的血凝活性和蛋白浓度检测 | 第40-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 第五章 硫酸铵分级盐析分离油脂和杂蛋白工艺初探 | 第44-51页 |
| 1 材料与试剂 | 第44页 |
| ·材料的获得 | 第44页 |
| ·试剂 | 第44页 |
| 2 方法 | 第44-47页 |
| ·硫酸铵分级沉淀条件的摸索 | 第44-46页 |
| ·血凝试验 | 第46页 |
| ·SDS-PAGE 检测 | 第46-47页 |
| ·Western blotting 检测 | 第47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-49页 |
| ·样品血凝实验结果 | 第47-49页 |
| ·SDS-PAGE 检测、Western blotting 检测结果 | 第49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 第六章 硫酸铵分级盐析分离油脂和杂蛋白工艺 | 第51-63页 |
| 1 材料与试剂 | 第51-52页 |
| ·材料的获得 | 第51页 |
| ·试剂 | 第51页 |
| ·主要溶液配制 | 第51页 |
| ·实验设备 | 第51-52页 |
| 2 | 第52-56页 |
| ·实验前准备工作 | 第52页 |
| ·匀浆 | 第52页 |
| ·低速离心 | 第52页 |
| ·高速离心 | 第52页 |
| ·硫酸铵分级沉淀蛋白 | 第52-53页 |
| ·超滤除盐 | 第53页 |
| ·区带离心 | 第53-54页 |
| ·超滤脱糖 | 第54页 |
| ·样品活性检测 | 第54-55页 |
| ·样品蛋白浓度测定 | 第55页 |
| ·SDS-PAGE 和Western blotting 检测 | 第55-56页 |
| 3 结果与分析 | 第56-61页 |
| ·工艺各个步骤样品的血凝活性和蛋白浓度检测 | 第56-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 第七章 膜抽滤、两次区带离心去除杂蛋白工艺初探 | 第63-68页 |
| 1 材料与试剂 | 第63页 |
| ·材料的获得 | 第63页 |
| ·试剂 | 第63页 |
| 2 工艺摸索 | 第63-64页 |
| ·抽滤处理 | 第63页 |
| ·两次区带离心与一次区带离心比较 | 第63-64页 |
| ·超滤脱糖与透析脱糖比较 | 第64页 |
| 3 结果与分析 | 第64-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 第八章 改进后的生产工艺 | 第68-79页 |
| 1 材料与试剂 | 第68-69页 |
| ·材料的获得 | 第68页 |
| ·试剂 | 第68页 |
| ·主要溶液配制 | 第68-69页 |
| ·实验设备 | 第69页 |
| 2 方法 | 第69-74页 |
| ·实验前准备工作 | 第69页 |
| ·匀浆 | 第69页 |
| ·低速离心 | 第69页 |
| ·高速离心 | 第69-70页 |
| ·硫酸铵分级沉淀蛋白 | 第70页 |
| ·超滤除盐 | 第70页 |
| ·第一次区带离心 | 第70-71页 |
| ·第二次区带离心 | 第71-72页 |
| ·透析除糖 | 第72页 |
| ·样品活性检测 | 第72-73页 |
| ·1%鸡红细胞悬液的制备 | 第72页 |
| ·血凝试验 | 第72-73页 |
| ·样品蛋白浓度测定 | 第73页 |
| ·SDS-PAGE 和Western blotting 检测 | 第73-74页 |
| 3 结果与分析 | 第74-78页 |
| ·工艺优化效果分析 | 第74-76页 |
| ·工艺的稳定性实验分析 | 第76-78页 |
| 4 讨论 | 第78-79页 |
| 第九章 基于家蚕多角体蛋白融合的Bm SMG9 蛋白高效表达及快速纯化研究 | 第79-91页 |
| 1. 材料和方法 | 第79-83页 |
| ·材料 | 第79-80页 |
| ·方法 | 第80-83页 |
| 2. 结果与分析 | 第83-89页 |
| ·生物信息学分析 | 第83-85页 |
| ·重组载体的构建 | 第85页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第85-86页 |
| ·酶切后纯化结果 | 第86-87页 |
| ·TEV 酶酶切结果及鉴定 | 第87-88页 |
| ·酶切后目的蛋白的回收 | 第88页 |
| ·家蚕五龄幼虫各组织中BmSMG9 基因的荧光定量PCR 数据结果 | 第88-89页 |
| 3. 讨论 | 第89-91页 |
| 总结 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
