| 第一章 前言 | 第1-31页 |
| 一、硒代半胱氨酸插入机制 | 第11-20页 |
| 1. 硒的生物学功能及与疾病的关系 | 第12-13页 |
| 2. 哺乳动物硒蛋白的代谢功能 | 第13-15页 |
| 3. 硒蛋白的生物合成 | 第15-17页 |
| 4. 原核生物的硒代半胱氨酸插入元件 | 第17-18页 |
| 5. 真核生物的 SECIS | 第18-19页 |
| 6. 硒蛋白的原核表达 | 第19-20页 |
| 二、谷胱苷肽硫转移酶 | 第20-22页 |
| 三、绿色荧光蛋白 | 第22-28页 |
| 1. 发展历史 | 第22页 |
| 2. GFP 的结构、生化特性、发光机制、光谱特性 | 第22-24页 |
| 3. GFP 的改进 | 第24-25页 |
| 4. GFP 的应用研究进展 | 第25-28页 |
| 四、立论依据据 | 第28-31页 |
| 第二章 绿色荧光蛋白报告基因系统的构建 | 第31-49页 |
| 一、实验材料 | 第32-33页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·菌株和质粒 | 第32页 |
| ·主要仪器 | 第32-33页 |
| ·培养基和主要溶液的配制 | 第33页 |
| 二、实验方法 | 第33-40页 |
| ·质粒的提取 | 第33页 |
| ·gfp 基因的获得 | 第33-35页 |
| ·PCR 扩增sel 系列片段 | 第35-36页 |
| ·PCR 扩增cts 和cu 系列片段 | 第36页 |
| ·PCR 扩增gfp2 片段 | 第36-37页 |
| ·PCR 扩增sel-gfp 系列片段 | 第37-38页 |
| ·PCR 扩增cts-gfp 和cu-gfp 片段 | 第38-39页 |
| ·selC 基因的获得 | 第39-40页 |
| 三、结果分析 | 第40-47页 |
| ·GFP 报告载体的构建 | 第40-45页 |
| ·gfp-3’基因片段的扩增 | 第40-41页 |
| ·gfp-5’基因片段的扩增 | 第41-42页 |
| ·gfp 全长基因片段的扩增 | 第42页 |
| ·gfp2 全长基因片段的扩增 | 第42页 |
| ·cts 和cu 基因片段的扩增 | 第42-43页 |
| ·sel 系列基因片段的扩增 | 第43-44页 |
| ·sel-gfp 基因片段的扩增 | 第44页 |
| ·cts-gfp 和cu-gfp 基因片段的扩增 | 第44-45页 |
| ·pGFP-U,pGFP-TS,pGFP-2T,pGFP-CTS,pGFP-CU 载体的构建 | 第45-46页 |
| ·sel-gfp,cts-gfp 和cu-gfp,基因片段和pET-326 载体的双酶切 | 第45页 |
| ·DNA 片段的连接及连接产物的转化 | 第45-46页 |
| ·pBAD-SelC 载体的构建 | 第46-47页 |
| ·selC 基因片段的扩增 | 第46页 |
| ·selC 基因片段和pBAD33 载体的双酶切 | 第46-47页 |
| ·DNA 片段的连接及连接产物的转化 | 第47页 |
| 四、讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 GFP 在 E.coli 中表达及检测条件的优化 | 第49-62页 |
| 一、实验材料 | 第49-50页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| ·主要溶液的配制 | 第49-50页 |
| 二、实验方法 | 第50-53页 |
| ·质粒的转化 | 第50页 |
| ·pGFP 系列载体的转化 | 第50页 |
| ·不同诱导表达条件对绿色荧光蛋白荧光的影响 | 第50-52页 |
| ·IPTG 在不同菌OD600 值时起始诱导对GFP 荧光的影响 | 第50页 |
| ·不同IPTG 诱导浓度对GFP 荧光的影响 | 第50-51页 |
| ·不同诱导表达温度对 GFP 荧光的影响 | 第51页 |
| ·全细胞检测和超声破碎后检测对 GFP 荧光的影响 | 第51页 |
| ·细胞稀释倍数及其对应荧光值的变化 | 第51-52页 |
| ·样品直接检测和放置后检测对 GFP 荧光的影响 | 第52页 |
| ·绿色荧光蛋白鉴定及荧光的测量 | 第52-53页 |
| ·蛋白质聚丙烯酰胺凝胶变性电泳 | 第52页 |
| ·分子荧光测定 | 第52-53页 |
| 三、光蛋白表达条件的优化 | 第53-61页 |
| ·不同诱导表达条件对绿色荧光蛋白荧光的影响 | 第53-59页 |
| ·在菌株不同浓度时IPTG 起始诱导对GFP 荧光的影响 | 第53-54页 |
| ·不同IPTG 诱导浓度对GFP 荧光的影响 | 第54-56页 |
| ·不同诱导表达温度对 GFP 荧光的影响 | 第56-57页 |
| ·全细胞检测和超声破碎后检测对 GFP 荧光的影响 | 第57-58页 |
| ·细胞稀释倍数及其对应荧光值的变化 | 第58-59页 |
| ·样品直接检测和放置后检测对 GFP 荧光的影响 | 第59页 |
| ·蛋白质聚丙烯酰胺凝胶变性电泳鉴定绿色荧光蛋白 | 第59-61页 |
| 四、结果与讨论 | 第61-62页 |
| 第四章 利用 GFP 定量测定 E.coli 中 UGA 密码子的通读效率 | 第62-68页 |
| 一、实验材料 | 第62-63页 |
| ·主要试剂 | 第62页 |
| ·主要仪器 | 第62页 |
| ·主要溶液的配制 | 第62-63页 |
| 二、实验方法 | 第63-64页 |
| ·质粒的转化 | 第63页 |
| ·pGFP 系列载体的转化 | 第63页 |
| ·pGFP 系列载体与pSUABC 或pBAD-SelC 载体的共转化 | 第63页 |
| ·利用绿色荧光蛋白定量测定硒代半胱氨酸的通读效率 | 第63-64页 |
| ·培养基中是否添加无机硒对硒代半胱氨酸的通读效率的影响 | 第63页 |
| ·selC 基因与报告基因gfp 共表达对硒代半胱氨酸的通读效率的影响. | 第63-64页 |
| ·selA, selB 和selC 基因与报告基因gfp 共表达对硒代半胱氨酸的通读效率的影响 | 第64页 |
| ·利用绿色荧光蛋白分析 UGA 密码子的体内编码 | 第64页 |
| 三、结果与讨论 | 第64-68页 |
| ·利用绿色荧光蛋白定量测定硒代半胱氨酸的通读效率 | 第64-67页 |
| ·利用绿色荧光蛋白分析 UGA 密码子的体内码 | 第67-68页 |
| 本文结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 作者简历 | 第77-78页 |
| 中文摘要 | 第78-80页 |
| 英文摘要 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
