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两个苦楝丛枝病植原体株系的比较鉴定

摘要第1-8页
ABSTRACT第8-10页
1 引言第10-30页
   ·植原体研究进展第11-14页
     ·植原体的发现及其分类的起步第11-12页
     ·植原体病害的症状第12-14页
     ·苦楝丛枝病植原体病害的研究状况第14页
   ·植原体病原特性第14-15页
     ·植原体的基本形态和超微结构第14页
     ·植原体的生理特征第14-15页
     ·植原体的传播方式第15页
   ·植原体的检测和鉴定第15-20页
     ·血清学检测第15-16页
     ·核酸杂交检测第16-17页
     ·PCR 检测第17-19页
     ·RFLP 检测第19-20页
   ·植原体的分类第20-24页
     ·基于生物学特性的分类第20-21页
     ·基于血清学和DNA 分子杂交的分类第21页
     ·基于核糖体RNA(ribosomal RNA,rRNA)的RFLP 分类第21-22页
     ·基于核糖体RNA 序列及系统发育的分类第22-24页
   ·植原体的分子生物学第24-26页
     ·165 rRNA 基因序列第25页
     ·165-235 rRNA 基因之间的间隔区域(SR)第25页
     ·核糖体蛋白质操纵子基因序列第25-26页
     ·延伸因子基因序列第26页
   ·植原体的系统发育研究第26-28页
   ·植原体基因组及其染色质外DNA第28-29页
   ·研究目的及意义第29-30页
2 材料与方法第30-37页
   ·材料来源第30页
   ·方法第30-37页
     ·苦楝丛枝病植株总DNA 提取第30页
     ·苦楝丛枝病植原体165 rRNA 基因的PCR 扩增第30-32页
       ·引物设计与合成第30-31页
       ·直接PCR( Direct-PCR)第31页
       ·巢式PCR( Nested-PCR )第31-32页
     ·苦楝丛枝病植原体的16SrRNA 基因扩增产物的RFLP 分析第32-33页
       ·苦楝丛枝病植原体酶切第32页
       ·扩增产物的聚丙烯酰胺电泳检测第32-33页
     ·苦楝丛枝病植原体核糖体蛋白( RIBOSOMAL PROTEIN,RP)基因的PCR 扩增第33页
       ·引物设计与合成第33页
       ·PCR 扩增第33页
     ·苦楝丛枝病植原体165 rRNA 基因和核糖体蛋白(ribosomal protein,rp 基因序列的克隆及序列测定第33-37页
       ·PCR 产物纯化第33-34页
       ·连接第34页
       ·感受态细胞制备第34-35页
       ·转化第35页
       ·重组质粒DNA 提取(采用碱裂解法提取少量质粒)第35-36页
       ·重组质粒DNA 酶切鉴定第36页
       ·重组质粒DNA 的PCR 鉴定第36页
       ·序列测定第36页
       ·序列同源性比较第36-37页
3 结果与分析第37-50页
   ·感病植株的症状表现第37页
   ·苦楝丛枝病植原体165 RDNA PCR 扩增结果第37-39页
   ·苦楝丛枝病植原体165 RDNA PCR-RFLP 比较分析第39页
   ·苦楝丛枝病植原体核糖体蛋白基因(RP)片段的PCR 扩增结果第39-40页
   ·苦楝丛枝病植原体的克隆及重组质粒酶切鉴定结果第40-43页
     ·重组质粒提取及酶切结果第40-42页
     ·苦楝丛枝病植原体的重组质粒PCR 鉴定结果第42-43页
   ·苦楝丛枝病植原体的165 RRNA基因和核糖体蛋白基因序列测定及同源性比较结果第43-50页
     ·苦楝丛枝病植原体云南株系和贵州株系间的165 rRNA 基因比较结果第43-45页
     ·苦楝丛枝病植原体云南株系和贵州株系间的核糖体蛋白基因比较结果第45-46页
     ·苦楝丛枝病植原体云南株系和贵州株系与其他植原体株系的165 rRNA 基因序列分析及同源性比较结果第46-47页
     ·苦楝丛枝病植原体与其他植原体株系核糖体蛋白基因(rp)序列分析及同源性比较结果第47-50页
4 讨论第50-53页
   ·首次在云南省及贵州省报道了苦楝丛枝病第50页
   ·云南苦楝丛枝病和贵州苦楝丛枝病均为同一个植原体株系引起第50页
   ·苦楝丛枝病植原体云南株系和贵州株系的165 RRNA 和核糖体蛋白基因的差异第50页
   ·引起不同症状的苦楝植原体株系的分类差异第50-51页
   ·基于165R RNA 和核糖体蛋白基因对苦楝丛枝病植原体云南株系和贵州株系的分类第51-52页
   ·苦楝丛枝病植原体云南株系和贵州株系的复合侵染第52-53页
5 结论与展望第53-54页
参考文献第54-62页
附录A 常用的化学试剂量、分子生物试剂和仪器第62-63页
附录B 常用试剂的配制第63-66页
附录C 缩略词第66-67页
致谢第67页

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