| 独创性声明 | 第1-3页 |
| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-12页 |
| 缩写词 | 第12-14页 |
| 第一章 综述 | 第14-38页 |
| 1．1 转基因技术在草坪草育种上的应用 | 第14-30页 |
| 1．1．1 离体培养及植株再生体系的建立 | 第14-17页 |
| 1．1．1．1 胚性愈伤组织、细胞悬浮系与原生质体培养 | 第14-16页 |
| 1．1．1．2 植株再生 | 第16-17页 |
| 1．1．2 草坪草遗传转化体系的建立 | 第17-21页 |
| 1．1．2．1 原生质体转化方法 | 第17-18页 |
| 1．1．2．2 不依赖于原生质体的转化方法 | 第18-21页 |
| 1．1．2．3 其它转化方法 | 第21页 |
| 1．1．3 表达载体的构建 | 第21页 |
| 1．1．4 转化体筛选与转基因植株的鉴定 | 第21-23页 |
| 1．1．4．1 利用标记基因筛选 | 第21-22页 |
| 1．1．4．2 生长试验 | 第22页 |
| 1．1．4．3 遗传鉴定 | 第22-23页 |
| 1．1．5 草坪草育种中应用转基因技术存在的问题 | 第23-25页 |
| 1．1．5．1 基因型的限制 | 第23页 |
| 1．1．5．2 组织培养过程中变异的发生 | 第23-24页 |
| 1．1．5．3 基因转化体系的完善与扩展 | 第24页 |
| 1．1．5．4 外源基因的高效表达 | 第24-25页 |
| 1．1．5．5 标记基因的去除 | 第25页 |
| 1．1．5．6 转基因草坪草向大田释放的风险性 | 第25页 |
| 1．1．6 转基因技术在草坪草育种中应用的发展前景 | 第25-30页 |
| 1．2 日本结缕草基因工程研究进展 | 第30-33页 |
| 1．2．1 日本结缕草离体植株再生 | 第30-31页 |
| 1．2．2 日本结缕草的遗传转化 | 第31-32页 |
| 1．2．2．1 基因转化 | 第31-32页 |
| 1．2．2．2 基因表达 | 第32页 |
| 1．2．3 应用转基因技术培育日本结缕草新品种的育种方向 | 第32-33页 |
| 1．2．3．1 延长绿期 | 第32-33页 |
| 1．2．3．2 提高抗性 | 第33页 |
| 1．2．3．3 抗除草剂 | 第33页 |
| 1．3 DREB转录因子及其在植物中的转化 | 第33-36页 |
| 1．3．1 渗透胁迫应答基因 | 第33-34页 |
| 1．3．2 DREB转录因子 | 第34-35页 |
| 1．3．3 DREB转录因子在植物中的转化 | 第35-36页 |
| 1．4 本研究意义、目标和内容 | 第36-38页 |
| 1．4．1 选题背景与研究意义 | 第36页 |
| 1．4．2 研究目标 | 第36-37页 |
| 1．4．3 主要研究内容 | 第37-38页 |
| 第二章 日本结缕草植株再生体系的建立 | 第38-62页 |
| 2．1 材料与方法 | 第38-41页 |
| 2．1．1 材料 | 第38-39页 |
| 2．1．1．1 植物材料 | 第38页 |
| 2．1．1．2 培养基 | 第38-39页 |
| 2．1．2 种子的消毒 | 第39页 |
| 2．1．3 愈伤组织的诱导与继代 | 第39页 |
| 2．1．4 愈伤组织生长量的测定 | 第39页 |
| 2．1．5 愈伤组织的分化与植株再生 | 第39页 |
| 2．1．6 试验设计 | 第39-41页 |
| 2．1．7 数据统计 | 第41页 |
| 2．2 结果与分析 | 第41-59页 |
| 2．2．1 以日本结缕草种子为外植体诱导愈伤组织 | 第41-54页 |
| 2．2．1．1 预处理对日本结缕草成熟种子愈伤诱导率的影响 | 第41-43页 |
| 2．2．1．2 不同因素对日本结缕草种子诱导愈伤组织的影响 | 第43-52页 |
| 2．2．1．3 日本结缕草种子诱导愈伤的多因素正交实验 | 第52-54页 |
| 2．2．2 以无菌实生苗各部分为外植体诱导愈伤组织的正交实验 | 第54-57页 |
| 2．2．2．1 以胚轴、根段及幼芽诱导愈伤组织的正交实验 | 第54-56页 |
| 2．2．2．2 以芽尖诱导愈伤组织的正交实验 | 第56-57页 |
| 2．2．3 愈伤组织生长曲线的测定 | 第57-58页 |
| 2．2．4 不同培养基对植株再生的影响 | 第58-59页 |
| 2．3 结论与讨论 | 第59-62页 |
| 2．3．1 外植体的选择 | 第59-60页 |
| 2．3．2 基因型对愈伤组织诱导的影响 | 第60页 |
| 2．3．3 激素的协同作用对日本结缕草愈伤组织诱导的影响 | 第60-61页 |
| 2．3．4 愈伤组织继代与胚性的维持 | 第61页 |
| 2．3．5 植株再生 | 第61-62页 |
| 第三章 DREB1A基因导入日本结缕草的研究 | 第62-90页 |
| 3．1 材料与方法 | 第62-68页 |
| 3．1．1 材料 | 第62-63页 |
| 3．1．1．1 受体植物材料 | 第62页 |
| 3．1．1．2 细菌和质粒 | 第62-63页 |
| 3．1．2 培养基 | 第63页 |
| 3．1．2．1 细菌培养基 | 第63页 |
| 3．1．2．2 受体材料培养基 | 第63页 |
| 3．1．2．3 基因枪转化用培养基 | 第63页 |
| 3．1．2．4 农杆菌介导转化用培养基 | 第63页 |
| 3．1．3 质粒DNA的制备 | 第63-65页 |
| 3．1．3．1 大肠杆菌受体细菌的培养 | 第63-64页 |
| 3．1．3．2 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第64页 |
| 3．1．3．3 质粒的转化 | 第64页 |
| 3．1．3．4 质粒DNA的提取 | 第64-65页 |
| 3．1．4 重组质粒由大肠杆菌向农杆菌中转移 | 第65页 |
| 3．1．5 基因枪转化 | 第65-67页 |
| 3．1．5．1 金粉DNA复合体的制备 | 第65页 |
| 3．1．5．2 受体材料的处理 | 第65页 |
| 3．1．5．3 受体材料的轰击 | 第65-66页 |
| 3．1．5．4 转化子的筛选 | 第66页 |
| 3．1．5．5 GUS表达的检测 | 第66-67页 |
| 3．1．6 农杆菌介导转化 | 第67-68页 |
| 3．1．6．1 农杆菌的培养与活化 | 第67页 |
| 3．1．6．2 农杆菌介导的遗传转化 | 第67-68页 |
| 3．1．6．3 抑菌剂对农杆菌和外植体生长的影响 | 第68页 |
| 3．2 结果与分析 | 第68-84页 |
| 3．2．1 不同因素对日本结缕草基因枪转化效率的影响 | 第68-76页 |
| 3．2．1．1 筛选压的确定 | 第68-70页 |
| 3．2．1．2 基因枪转化参数的多因素正交实验 | 第70-71页 |
| 3．2．1．3 金粉直径对转化效率的影响 | 第71-72页 |
| 3．2．1．4 渗透处理对转化效率的影响 | 第72-73页 |
| 3．2．1．5 预培养对转化效率的影响 | 第73页 |
| 3．2．1．6 延迟筛选对转化效率的影响 | 第73-74页 |
| 3．2．1．7 受体状态对转化效率的影响 | 第74-75页 |
| 3．2．1．8 日本结缕草不同品种间转化效率的差异 | 第75-76页 |
| 3．2．2 不同因素对日本结缕草农杆菌介导转化效率的影响 | 第76-83页 |
| 3．2．2．1 抑菌剂浓度的确定 | 第76-78页 |
| 3．2．2．2 菌液浓度对转化效率的影响 | 第78-79页 |
| 3．2．2．3 侵染时间对转化效率的影响 | 第79页 |
| 3．2．2．4 共培养时间对转化效率的影响 | 第79-80页 |
| 3．2．2．5 预培养对转化效率的影响 | 第80-81页 |
| 3．2．2．6 乙酰丁香酮浓度对转化效率的影响 | 第81-82页 |
| 3．2．2．7 真空处理对转化效率的影响 | 第82-83页 |
| 3．2．3 基因枪与农杆菌转化效率的差异 | 第83-84页 |
| 3．3 结论与讨论 | 第84-90页 |
| 3．3．1 日本结缕草遗传转化体系 | 第84-86页 |
| 3．3．2 受体对转化效率的影响 | 第86页 |
| 3．3．3 筛选方案对转化效率的影响 | 第86-87页 |
| 3．3．4 转化方法对转化效率的影响 | 第87-89页 |
| 3．3．5 DREB1A基因的导入对日本结缕草生长的影响 | 第89-90页 |
| 第四章 抗性植株的检测 | 第90-96页 |
| 4．1 材料与方法 | 第90-93页 |
| 4．1．1 植物材料 | 第90页 |
| 4．1．2 组织化学染色 | 第90页 |
| 4．1．3 抗性植株的分子检测 | 第90-93页 |
| 4．1．3．1 植物DNA的提取 | 第90-91页 |
| 4．1．3．2 抗性植株的PCR分析 | 第91页 |
| 4．1．3．3 抗性植株的Southern印迹杂交 | 第91-93页 |
| 4．2 结果与分析 | 第93-94页 |
| 4．2．1 GUS检测 | 第93页 |
| 4．2．2 抗性植株的分子检测 | 第93-94页 |
| 4．3 结论与讨论 | 第94-96页 |
| 第五章 结论 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-110页 |
| 附图 | 第110-112页 |
| 个人简介 | 第112-113页 |
| 导师简介 | 第113-114页 |
| 获得成果目录清单 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
